华蟾素乳剂对小鼠Lewis肺癌的药效学研究(2)
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K=(lgOD1-lgOD2)/t2-t1；α=K1/3×体重/(肝重+脾重)
OD1和OD2为不同时间所取血样的光密度，t2-t1为取两血样的时间差。
1.3.3 对溶血素的影响从给药后第9天开始，所有5组鼠均腹腔注射5%生理盐水鸡红细胞混悬液0.5 ml进行免疫。于第16天末次给药60 min后摘眼球取血，离心，取血清稀释50倍，取稀释血清1 ml与5%生理盐水鸡红细胞混悬液0.5 ml、10%补体混合，在37℃恒温箱中保温30 min后，0℃冰箱中中止反应。离心，取上清液于721分光光度计540 nm处比色，测定OD，另设不加血清的空白对照，取其上清液作为比色时调零的基准。以该OD读数作为判定血清溶血素的指标，比较各组的差异。其中鸡红细胞在4℃冰箱于Alsever氏液中保存，临用时用生理盐水洗涤3次，配成5%生理盐水鸡红细胞混悬液即可。补体以3只豚鼠的血清混合，用生理盐水配成10%(即1∶10)。Alsever氏液：枸橼酸三钠·2H2O 8.0 g，枸橼酸0.5 g，无水葡萄糖18.7 g，氯化钠4.2 g，蒸馏水加至1 000 ml，过滤分装，10磅高压20 min 4℃冰箱保存备用。鸡红细胞混悬液：于无菌条件下，自鸡翼下静脉采血，置100 ml疫苗瓶中，加入相当于鸡血体积5倍的Alsever氏液，混匀，4℃冰箱保存。临用时用生理盐水洗涤，离心(532.5 g，5 min)3次，直至血细胞比容值恒定，弃上清液和界面白细胞层。
1.4 统计学方法
计量资料以均数±标准差(x±s)表示，组间比较采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 华蟾素乳剂对肿瘤重量及生长抑制率的影响
荷瘤华蟾素乳剂给药组、荷瘤环磷酰胺给药组及荷瘤华蟾素乳剂与环磷酰胺联合给药组肿瘤重量均低于荷瘤对照组，而抑制率均高于荷瘤对照组；荷瘤华蟾素乳剂给药组与荷瘤环磷酰胺给药组的瘤重和抑制率相近；联合给药组的瘤重明显低于荷瘤华蟾素乳剂给药组和荷瘤环磷酰胺给药组，而抑制率明显高于荷瘤华蟾素乳剂给药组和荷瘤环磷酰胺给药组，提示华蟾素乳剂不仅对小鼠Lewis肺癌实体瘤有抑制作用，而且与环磷酰胺有协同效果(表1)。
荷瘤华蟾素乳剂给药组、荷瘤华蟾素乳剂与环磷酰胺联合给药组体重增加分别为(9.91±1.84) g(P<0.001)、(7.83±2.98) g(P<0.01)，明显高于荷瘤对照组的(4.02±1.80) g，而荷瘤化疗组较正常对照组的体重增加(11.37±1.52) g明显减轻(P<0.001)。提示华蟾素乳剂给药可使荷瘤小鼠体重明显增加，改善荷瘤小鼠的生存质量，而荷瘤环磷酰胺给药组为(4.32±2.49) g，影响小鼠的生存质量。
2.2 华蟾素乳剂对小鼠碳粒廓清能力的影响
荷瘤对照组、荷瘤华蟾素乳剂给药组、荷瘤环磷酰胺给药组及荷瘤华蟾素乳剂与环磷酰胺联合给药组K值和α值均低于正常对照组，但是荷瘤华蟾素乳剂给药组的K值无明显降低；而且荷瘤华蟾素乳剂给药组的α值明显高于荷瘤对照组，显示华蟾素乳剂给药后可以显著提高荷瘤小鼠的碳粒廓清能力。荷瘤华蟾素乳剂与环磷酰胺联合给药组的K值明显高于荷瘤环磷酰胺联合给药组，提示华蟾素乳剂不仅提高荷瘤小鼠的碳粒廓清能力，而且可以改善由于环磷酰胺导致的碳粒廓清能力降低(表2)。
表2 华蟾素乳剂对小鼠碳粒廓清能力的影响(x±s，n=10)
Tab.2 Effects of Huachansu Parenteral Emulsion on the carbon clearance test in mice (x±s, n=10)
注：与正常对照组相比，※P<0.05，※※P<0.01，※※※P<0.001；与荷瘤对照组相比，**P<0.01；与荷瘤环磷酰胺给药组相比，#P<0.05
Note：Compared with normal control group, ※P<0.05, ※※P<0.01, ※※※P<0.001; compared with the bearing cancer vehicle-treated control group, **P<0.01; compared with the bearing cancer cyclophosphamide-treated group, #P<0.05
2.3 华蟾素乳剂对小鼠溶血素的影响
荷瘤华蟾素乳剂给药组、荷瘤环磷酰胺给药组及荷瘤华蟾素乳剂与环磷酰胺联合给药组OD值均明显低于正常对照组，而荷瘤华蟾素乳剂给药组的OD值无明显降低；而且荷瘤华蟾素乳剂给药组的OD值明显高于荷瘤对照组，显示华蟾素乳剂给药后可以显著提高荷瘤小鼠的溶血素水平。荷瘤华蟾素乳剂与环磷酰胺联合给药组的OD值明显高于荷瘤环磷酰胺联合给药组，提示华蟾素乳剂不仅可提高荷瘤小鼠的溶血素水平，而且可以改善由于环磷酰胺导致的免疫能力降低(表3)。
3 讨论
肺癌是目前发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一，对放疗、化疗及免疫治疗的敏感性均较差。因此寻找安全、有效的药物依然是肿瘤治疗工作的重要课题。采用抗肿瘤中药治疗恶性肿瘤是具有中国特色的肿瘤治疗方式[12]。经过近10年的研究和开发，目前已有多种中药制剂获准用于肿瘤的常规治疗。在我们的研究中观察到，荷瘤华蟾素乳剂与环磷酰胺联合给药组的抑瘤率明显高于荷瘤华蟾素乳剂给药组和荷瘤环磷酰胺给药组，提示华蟾素乳剂有一定的抗癌作用和增强化疗效果的作用；除此之外，华蟾素乳剂进入机体后，能剌激机体的免疫系统，增强机体的细胞免疫功能以及体液免疫功能，表现为荷瘤华蟾素乳剂给药组和荷瘤华蟾素乳剂与环磷酰胺联合给药组在给药后廓清指数K和校正廓清指数α明显高于荷瘤对照组和环磷酰胺给药组，血清溶血素水平也明显提高，从而达到治疗肺癌免疫功能低下的目的。本研究结果显示荷瘤华蟾素乳剂给药组和荷瘤华蟾素乳剂与环磷酰胺联合给药组明显好于荷瘤对照组，说明华蟾素乳剂的使用有利于提高生存质量。初步研究发现华蟾素乳剂对Lewis肺癌实体瘤有明显疗效，其作用机制可能与其本身有抗癌作用和增强机体的免疫功能有关，具体作用机制有待进一步探讨。
研究表明，华蟾素乳剂能显著增强正常小鼠单核吞噬细胞对碳粒的吞噬功能以及体液免疫功能，使环磷酰胺免疫抑制小鼠碳粒廓清指数K、α值以及溶血素水平恢复至正常水平，有效地恢复和增强继发性免疫功能低下小鼠的细胞免疫功能，具有免疫调节作用，可以提高小鼠单核巨噬细胞的吞噬功能和体液免疫功能。
[参考文献]
[1]程文宁,肖家全.华蟾素抗肿瘤作用及其机制研究进展[J].医学综述,2009,15(8):1193-1208.
[2]王双双,李柏,瞿笑枫.华蟾素注射液抗肿瘤应用及其机制研究进展[J].山东中医药大学学报,2008,32(5):436-438.
[3]逯华,陈日新.华蟾素抗恶性肿瘤的研究进展[J] ......
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