注射用脑蛋白水解物对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞增殖与氧化损伤的影响(1)
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[摘要] 目的：探讨注射用脑蛋白水解物对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞的增殖与过氧化氢氧化损伤的影响。方法：采用MTT法，观察不同浓度的注射用脑蛋白水解物对体外培养的大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞(PC12)生长及过氧化氢损伤保护的作用。结果：注射用脑蛋白水解物对PC12细胞的增殖及氧化损伤的保护作用存在量效关系。结论：注射用脑蛋白水解物可促进PC12细胞生长，并可保护细胞减轻过氧化氢的损伤。
[关键词] 注射用脑蛋白水解物；大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞；MTT
[中图分类号] R781.4[文献标识码]A [文章编号]1673-7210(2011)04(a)-030-02
Effects of cerebroprotein hydrolysate for injection on PC12 pheochromocytoma cells proliferation and oxidative damage
JIANG Yuhui, LIANG Weiyang
Guangdong Institute for Drug Control, Guangzhou 510180, China
[Abstract] Objective: To explore the biological effects of cerebroprotein hydrolysate for injection on the proliferation and oxidative damaged rat pheochromocytoma cells (PC12). Methods: Thiazoly blue (MTT) colorimetric assay was used to determine the proliferation and oxidative damaged protection of PC12 cells after different doses of cerebroprotein hydrolysate for injection were added into the culture medium. Results: The proliferation and protection effects on PC12 cells of cerebroprotein hydrolysate for injection were depended on its doses. Conclusion: Cerebroprotein hydrolysate for injection may promote the proliferation and protect the PC12 cells injured from oxidation.
[Key words] Cerebroprotein hydrolysate for injection; Rat pheochromocytoma cells; MTT
注射用脑蛋白水解物为健康乳猪脑经酶水解制成的无菌冻干制剂，含75%~80%游离氨基酸和20%~25%小分子肽。它具有良好的健脑、益智、修复脑损伤的功效，临床上可用于神经系统疾病特别是阿尔茨海默病的治疗，是近年来应用最多的生化药物之一[1-2]。大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)是体外神经细胞增殖、损伤及保护作用研究使用最为广泛的细胞系[3]。注射用脑蛋白水解物对PC12细胞的体外影响，国内外少见报道。本文旨在探讨注射用脑蛋白水解物对PC12细胞增殖和过氧化氢诱导损伤的影响。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 细胞株大鼠肾上腺PC12细胞株购自上海细胞生物所。
1.1.2 药物与试剂注射用脑蛋白水解物(广东阳江制药厂有限公司产品，批号为100401)；药用级氨基酸(杭州华锦药业有限公司)；RPMI 1640培养液(Gibco，USA)；小牛血清(广州鼎国生物技术有限公司)；胰酶(Gibco，USA)；噻唑蓝(MTT，Amersco，USA)；过氧化氢(广州化学试剂厂)。
1.1.3 主要仪器生物安全柜(Nuaire，USA)；二氧化碳培养箱(Sanyo，Japan)；倒置相差显微镜(Olympus，Japan)；紫外可见光连续光谱仪(Molecular Devices，USA)。
1.2 方法
1.2.1 接种细胞取对数生长期的PC12细胞用胰酶消化后制成细胞悬液，以105个/ml的浓度接种于96孔细胞培养板内，每孔100 μl，置入37℃、5%CO2的无菌培养箱中培养4 h，待细胞贴壁后进行增殖和损伤实验。
1.2.2 细胞增殖实验96孔板内细胞分为对照组、氨基酸组和4个实验组，每组6孔。对照组加入10%小牛血清-RPMI 1640培养液；实验组分别加入含不同浓度注射用脑蛋白水解物(含氮量5、50、100、300 mg/L)的10%小牛血清-RPMI 1640培养液；氨基酸组加入按照注射用脑蛋白水解物质量标准[4]中氨基酸含量配制的氨基酸溶液，每孔100 μl，培养48 h，进行MTT检测。
1.2.3 细胞损伤实验96孔板内细胞分为对照组、损伤组、氨基酸组和4个实验组，每组6孔。对照组、损伤组加入10%小牛血清-RPMI 1640培养液，实验组和氨基酸组按“1.4.1”中加入样品，每孔100 μl，培养24 h。损伤组、氨基酸组、实验组加入0.5 mmol/L H2O2 ......
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