牛蒡根化学成分对大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞增殖的影响(2)
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参见附件(3124KB，3页)。
2.4 MTT法体外药物筛选
将24孔板置于37℃，5%CO2培养箱中培养24 h，完全培养基稀释药物至所需浓度，每孔加入100 μl相应的含药培养基，同时设立阴性对照组，在CO2培养箱中培养48、72 h；对24孔板细胞进行MTT染色，λ=490 nm，测定OD值。每孔加入20 μl MTT(5 mg/ml)，在培养箱继续培养4 h；弃去培养基，每孔加入150 μl DMSO溶解，摇床10 min轻轻混匀；λ=490 nm，酶标仪读出每孔的OD值，按照下列公式计算出增殖率：增殖率=试验组A490均值/空白对照组A490均值×100%。
2.5样品山奈素
操作同“2.4”。
2.6统计学方法
实验结果采用SPSS9.0软件进行方差分析，数据以(x±s)表示。两组间均数比较采用两样本的t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
2.7 实验结果
2.7.1 加入牛蒡低聚果糖48 h后，对大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞增殖的影响见表1。加入牛蒡低聚果糖100、50 μg/ml 48 h后，与阴性对照组比较，大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞显著增殖，差异有统计学意义(P<0.05)；加入牛蒡低聚果糖25、12.5 μg/ml 48 h后，与阴性对照组比较，对细胞的增殖无明显促进作用。
2.7.2加入牛蒡低聚果糖72 h后，对大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞增殖的影响见表2。牛蒡低聚果糖200 μg/ml作用于大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞72 h后，与阴性对照组比较，差异无统计学意义；100、 50、25 μg/ml组 72 h后，与阴性对照组比较，对细胞的增殖有明显促进作用(P<0.05)，且有时间依赖性。因此，牛蒡低聚果糖能够促进平滑肌细胞的增殖。
2.7.3加入山奈素48 h后，对大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞增殖的影响见表3。加入山奈素25、12.5 μg/ml 48 h后，与阴性对照组比较，细胞增殖明显(P<0.05)；200 μg/ml组和100 μg/ml组出现抑制细胞增长的现象。
2.7.4加入山奈素72 h后，对大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞增殖的影响，见表4。加入山奈素72 h后，50 μg/ml组与阴性对照组比较，差异无统计学意义；200 μg/ml组、100 μg/ml组对细胞的增殖有抑制作用；25 μg/ml组、12.5 μg/ml组显示能够明显促进细胞的增殖，且有时间依赖性。因此，牛蒡根化学成分山奈素低浓度能够促进平滑肌细胞的增殖，高浓度时出现抑制平滑肌细胞的增殖。
3讨论
目前，多数医生及患者满足于勃起功能的暂时改善，而忽略对ED病因及其机制进一步探讨。国内学者通过体内外实验已经证实一氧化氮在舒张海绵体平滑肌方面起着重要的作用[4-6]。正常阴茎海绵体由结缔组织和平滑肌组成的勃起组织海绵窦组成，其中，平滑肌占40%~52%。海绵体平滑肌数量减少，结缔组织增加可导致勃起功能障碍。在阴茎勃起这个过程中阴茎海绵体平滑肌发挥着重要的作用[7-10]。在性刺激下，神经信号通过阴茎海绵体神经传导至阴茎末梢，释放诱发阴茎勃起的生物活性因子，使阴茎动脉扩张和阴茎海绵体平滑肌松弛，达到阴茎勃起的目的。研究表明：ED患者阴茎勃起组织中42.3%平滑肌细胞有显著的病理改变，且平滑肌在勃起组织中的含量仅占10%～36%，而对照组为40%~60%[11-12]。本实验我们以牛蒡根化学成分牛蒡低聚果糖和山奈素来刺激大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞的增殖，应用MTT法检测细胞数量来判断平滑肌细胞的增殖情况，结果显示，用牛蒡低聚果糖和山奈素来刺激大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞，可以显著增殖细胞。
综上所述，牛蒡根化学成分牛蒡低聚糖和山奈素可对体外培养大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞起到增殖的作用，可能是牛蒡根能够治疗阴茎勃起功能障碍的机制。
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