HPLC法同时测定救心丸中华蟾酥毒基\脂蟾毒配基含量
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[摘要] 目的：建立救心丸中华蟾酥毒基、脂蟾毒配基的含量测定方法。方法：色谱柱：C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；柱温：40℃；流动相：乙腈-0.5%磷酸二氢钾(pH=3.2)(50∶50)；流速：1.0 ml/min；检测波长：296 nm。结果：华蟾酥毒基在0.498~2.490 μg范围内线性关系良好；脂蟾毒配基在0.570~2.850 μg范围内线性关系良好。结论：本方法简便、准确，重复性好，可作为救心丸的质量控制方法。
[关键词] 救心丸；华蟾酥毒基；脂蟾毒配基；高效液相色谱法
[中图分类号] R971 [文献标识码] A[文章编号]1673-7210(2011)04(a)-064-02
Content determination of cinobufagin and resibufogenin in Jiuxin Pills by HPLC
QU Jing1, WANG Yanchun2, CONG Peiwei1
1.Liaoning University of Traditional Chinese Medicine, Shenyang 110032, China; 2.Affiliated Hospital to Liaoning University of Traditional Chinese Medicine, Shenyang 110032, China
[Abstract] Objective: To establish an HPLC method for content determination of cinobufagin and resibufogenin in Jiuxin Pills. Methods: The column was C18(250 mm×4.6 mm, 5 μm).The mobile phase was acetonitrile-0.5%KH2PO4(pH=3.2)(50∶50)and the flow rate was 1.0 ml/min. The detection wavelength was at 296 nm. Results: Cinobufagin had a good linearity between 0.498-2.490 μg and resibufogenin had a good linearity between 0.570-2.850 μg. Conclusion: The method is simple and accurate with good repeatability and can be used for the quality control of cinobufagin and resibufogenin in Jiuxin Pills.
[Key words] Jiuxin Pills; Cinobufagin; Resibufogenin; HPLC
救心丸是由蟾酥、人参茎叶总皂苷、珍珠、冰片等组成，有益气活血，化痰通络的功效，临床用于痰浊瘀血痹阻心脉而致的胸痹心痛、胸闷、气短、心悸、怔忡等[1]。华蟾酥毒基、脂蟾毒配基是蟾酥的活性成分[2-4]，为了有效控制制剂质量及用药安全，本实验建立了高效液相色谱法同时测定救心丸中华蟾酥毒基、脂蟾毒配基含量的方法，该方法操作简便，结果准确可靠[5-8]。
1仪器与试药
1.1仪器
日本岛津LC-10ATvp高效液相色谱仪；SPD-10Avp紫外检测器；AS3120A超声提取器。
1.2试药
华蟾酥毒基(批号：803-9202)及脂蟾毒配基(批号：0718-9306)由中国药品生物制品检定所提供。乙腈、甲醇为色谱纯，水为重蒸水，其他试剂均为分析纯。救心丸供试品为实验室自制(批号：080401)。
2方法与结果
2.1色谱条件与适用性试验
色谱柱：C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；柱温：40℃；流动相：乙腈-0.5%磷酸二氢钾(pH=3.2)(50∶50)；流速：1.0 ml/min；检测波长：296 nm。
2.2溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷减压干燥24 h的华蟾酥毒基、脂蟾毒配基对照品适量，加甲醇制成每1 ml含华蟾酥毒基40 μg、脂蟾毒配基40 μg的溶液，即得。
2.2.2 供试品溶液的制备取本品20粒，研细，取0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20 ml，密塞，称定重量，超声提取1 h，取出，放冷至室温，再称定重量，加甲醇补足减失重量，摇匀，即得。
2.2.3 阴性液的制备取除去蟾酥的其他处方药材，按样品制备方法制成阴性样品，按“2.2”项下方法制成阴性液。
2.3色谱图绘制及阴性液干扰试验
精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性液各20 μl注入液相色谱仪中,按前述色谱条件测定,结果在与对照品色谱峰相应的位置上供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰,阴性液在此峰位无吸收,对本品的华蟾酥毒基、脂蟾毒配基含量测定无干扰，见图1。
2.4线性范围考察
分别精密吸取华蟾酥毒基、脂蟾毒配基对照品的混合溶液3.0、6.0、9.0、12.0、15.0 μl，按上述色谱条件测定峰面积，以对照品溶液浓度(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，绘制标准曲线，经线性回归，得华蟾酥毒基回归方程为：Y=383 425.7X+3 202.6，r=0.999 9；脂蟾毒配基回归方程为：Y=415 973.7X+4 345.8，r=0.999 5。华蟾酥毒基在0.498~2.490 μg范围内线性关系良好；脂蟾毒配基在0.570~2.850 μg范围内线性关系良好。
2.5 精密度试验
取同一供试品溶液，按含量测定项下方法操作，连续进样5次，结果测得华蟾酥毒基的RSD为1.38%，脂蟾毒配基的RSD为1.41%。
2.6稳定性试验
取同一供试品，分别在0、2、4、6、8 h，进样测定峰面积，色谱峰面积积分值在8 h内基本无变化，华蟾酥毒基的RSD为0.42%，脂蟾毒配基的RSD为0.88%。结果表明供试品溶液在8 h内稳定。
2.7重复性试验
取同一批号样品5份，分别按含量测定项下方法测定，结果测得华蟾酥毒基的RSD为0.87%，脂蟾毒配基的RSD为1.16%。
2.8回收率试验
精密称取已知含量样品(华蟾酥毒基1.278 mg/g，脂蟾毒配基1.833 mg/g)5份 ......
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