食蟹猴大规模痢疾流行暴发病因调查和疾病控制预防(2)
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食蟹猴(macaca fascicularis)属于猕猴属，生物学特性很多方面与恒河猴相似，并可在温带饲养和繁殖[1]。食蟹猴由于来源相对容易，体型小，性情温顺，实验用药量少和便于操作的特点在国内外医学研究领域中得到了广泛的应用，尤其在疟原虫实验动物模型的研究中占有重要的地位[2]。本文报道了某大型饲养场大规模食蟹猴痢疾暴发的基本情况、采取的应对措施和预防控制效果。同时采用传染病调查方法培养分离鉴定了导致本次疾病暴发流行的病原菌，并得到了相应的药敏试验结果。
1 材料与方法
1.1 食蟹猴猴场基本情况
该猴场为专业饲养繁殖食蟹猴的大型猴场，常年进出食蟹猴数万头。疾病暴发时饲养规模约15 000头。饲养方式约60%为单笼隔离饲养，35%左右为繁殖群半开放方式饲养，余下5%左右为圈养繁殖方式饲养。饲料由于当地条件所限采用商品化猪饲料作为主食，辅以当地青饲料饲喂，一日三餐。饮水方式隔离单笼用不锈钢水盒人工加自来水，群养和圈养方式配有自动饮水，人工定期加酸制备酸化水。卫生主要用扫帚每天上午清扫粪便，较少用自来水冲洗地面。
1.2 猴场痢疾暴发基本情况
2008年12月上旬开始，单笼饲养间陆续发现散在死亡病例，以新进猴场不久的猴子为多，后来逐步迅速扩散，蔓延至其他房间和较为稳定的老猴群。调查最多时每日达到二三十只猴子发病，死亡5只左右，并且由于没有明显先兆次日会有不确定的病例发生，形势十分严峻。食蟹猴不分年龄、体重、性别均有发病。
1.3 食蟹猴发病基本情况和初步诊断
食蟹猴发病前活动性饮食饮水正常，典型发病特征为一旦起病则较急，发病时初期表现为厌食或突然不进食，活动量显著减少，精神下降或萎靡，常呈蜷缩状蹲于笼子一角，个别甚或突然躺倒。次日腹泻，粪便较少带黏液，个别呈水样，颜色较正常粪便为深，无特别异常气味。第3日便中带血或脓血便，由于极度虚脱，常躺于笼内，四肢无力，体温下降，眼神呆滞，面色苍白，当日或第4日即死亡。尸体解剖后，主要内脏心、肝、脾、胰、肾均正常，肠胃空无，无肠套叠，外表肠炎不严重，除少量猴有肺炎外其余肺部正常。基本上可概括为发病突然无先兆、起病急、死亡快、死亡率高。根据以上特点，我们初步判断为肠道细菌传染病的可能性最大。
1.4 病猴治疗情况
在该猴场痢疾暴发期间，工作人员使用的主要抗生素有头孢唑啉、头孢拉定、硫酸阿米卡星注射液、氨苄青霉素、庆大霉素，使用剂量均按人千克体重使用量换算成猴子用量后肌内注射治疗使用。由于病猴较多，所选抗生素则根据个人所好和疗效观察结果在上述几种中选用，并未统一。由于病猴过多，有时疗程难于充分保障。大部分猴子无明显治疗效果，少部分猴有一定疗效，但只是普遍能多延长存活时间3 d左右，之后死亡。个别猴治好后(粪便、精神观察正常)停药1~4 d(通常2 d左右)又复发，同样用药则无效，一般当日或次日死亡，表现出复发即死亡的特点。
对于腹泻严重的动物则适当补液，补液用生理盐水加碳酸氢钠注射液混合注射于皮下，10 ml/只，每日1~2次，纠正酸碱失衡，据技术人员观察有一定效果。
1.5 病猴采样
对发病初期的猴子5只、中期5只和后期4只以及2只正常猴用肛拭子采样后插入Cary-Blair运送培养基中，4℃保存，送到本中心进行肠道细菌培养分离鉴定。
1.6 培养基、主要试剂和细菌生化鉴定系统
1.6.1 培养基S.S琼脂、三糖铁培养基、中国玫瑰蓝培养基、肠杆菌科细菌生化鉴定管，购自杭州天和微生物试剂有限公司，Cary-Blair运送培养基购自上海科兴生物科技有限公司。
1.6.2 主要试剂氧化酶试验试剂盒、革兰染色试剂盒，购自杭州天和微生物试剂有限公司。
1.6.3 细菌生化鉴定系统采用Vitek-2全自动细菌生化鉴定系统。
1.7 治疗方案修改
由于猴场员工所用抗生素多达6种，且使用剂量为参照人体公斤体重换算为同等体重动物的用药量，鉴于发病猴体重基本上在2~4 kg之间，剂量上显得欠缺和过分保守，不利于迅速控制病情。因此，根据我们对本次痢疾的初步判断，用药统一改为头孢哌酮钠，剂量为不到3 kg小猴每日0.5 g，3 kg以上大猴每日1.0 g，外加地塞米松注射液1 ml，碳酸氢钠注射液1 ml，给药途径统一改为静脉输液，输液量视体重约100~200 ml/只，每日1次。稀释液用氯化钠或葡萄糖氯化钠注射液。同时取消皮下补液。人手不济时直接用4 ml生理盐水稀释头孢哌酮钠后肌内注射，1支/d。疗程视大便正常饮食转好后继续给药1 d，实际治疗时间一般为3~5 d。该方案主要特点是兼顾了抗菌消炎、纠正电解质失衡，防止酸中毒和适当补充体液。根据现场情况判断，我们认为能够对症治疗。待病原菌培养鉴定结果和药敏试验结果出来后再根据情况调整。
1.8 细菌培养、分离、生化编码鉴定
从运送培养基中取出肛拭子，在S.S.琼脂糖培养基边缘上涂抹一个圆点，再用无菌接种环于圆点上涂抹后以“之”字形分三区划线，置37℃恒温培养箱培养18~24 h观察。用三糖铁琼脂和中国玫瑰蓝鉴别培养基作单个菌落的分离和初步培养特征鉴定。纯化的细菌按鉴定适用方法依据试剂盒使用说明书或实验要求进行革兰染色、氧化酶试验、触酶试验和细菌生化编码鉴定。
15种肠道杆菌生化编码鉴定管为：硫化氢、苯丙氨酸、葡萄糖酸盐、蛋白胨水、葡磷胨水、枸橼酸盐、尿素、半固体、赖氨酸、鸟氨酸、氨基酸对照、棉子糖、山梨醇、侧金盏花醇、木胶糖。
16种葡萄球菌生化编码鉴定管为：尿素、蔗糖、精水、木糖、乳糖，甘糖、木醇、麦芽糖、甘醇、乙酰葡胺、硝还、蜜二糖、果糖、V-P、山梨醇。
1.9 药敏试验
采用K-B纸片扩散法，判断标准按WHO质控标准菌株的敏感性及抑菌环测量大小解释[3-4]。本次所用药敏试纸片如下：头孢他啶(CAZ 30 μg/片)、头孢唑啉(CZ 30 μg/片)、妥布霉素(TM 10 μg/片)、阿莫西林克拉维酸钾(AM 20 μg/CA 10 μg/片)、环丙沙星(CIP 5 μg/片)、亚胺培南(IP 10 μg/片)、庆大霉素(GM 10 μg/片)、磺胺甲噁唑/甲氧苄定(SXT 23.75/125 μg/片)即复方磺胺(SMZ/TMP)、阿米卡星(AN 30 μg/片)、头孢哌酮(CFP 75 μg/片)、氨苄西林(AM 10 μg/片)、头孢拉定(CFR 30 μg/片)、小诺霉素(MCR 10 μg/片)。
为了确定猴场药品仓库的药品是否有效，我们将猴场所用药品头孢唑啉、头孢拉定、阿米卡星、氨苄西林、庆大霉素和小诺霉素按药敏纸片含量标准用手工方法制作药敏纸片使用。同时也按猴场实际使用治疗浓度制作阿米卡星、氨苄西林药敏纸片进行抑菌试验 ......
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