宫颈鳞癌组织淋巴管分布及密度的研究(2)
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参见附件(4907KB，7页)。
1.2.3 结果判定由两位病理医师盲法检测LVD计数。D2-40阳性染色定位于淋巴管内皮细胞，呈棕褐色。以D2-40染色观察淋巴管形态及分布情况，分别测定癌组织内、癌旁及正常宫颈组织内的LVD。具体为：先采用低倍物镜(100倍)下观察，确定5个着色最密集的区域，即热区。然后在高倍物镜(200倍)下计数D2-40阳性脉管数，取平均值。
1.3 统计学处理
采用SPSS 17.0统计软件进行t检验、近似t检验、Wilcoxon秩和检验和Kruskal-Wallis H检验。P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
宫颈浸润鳞癌组织内、癌旁及正常宫颈组织内均有淋巴管分布。D2-40阳性染色定位于淋巴管内皮细胞的胞浆和胞膜。D2-40染色阳性淋巴管呈棕褐色，有一个扩大、缺乏红细胞的管腔，管腔内可见到癌栓，而血管不着色(图1)；且可见癌细胞浸润D2-40阳性淋巴管(图2)及管腔内癌栓表面附有D2-40阳性淋巴管内皮细胞(图3)的现象。
淋巴管在宫颈浸润鳞癌中的分布不均匀，大多数瘤内淋巴管呈闭锁、扁平、裂隙状(图4)；瘤周淋巴管则呈扩大、膨胀、不规则状；而正常宫颈组织的淋巴管则比较规则。
宫颈浸润鳞癌癌组织内(7.21±2.30)及癌旁LVD(9.71±2.07)均明显高于正常宫颈组织LVD(1.55±1.04)，差异有高度统计学意义(Z值分别为-5.101、-5.308，P=0.000 )。癌旁LVD明显高于癌组织内，差异有高度统计学意义(Z=-5.778，P=0.000)。
2.1 宫颈浸润鳞癌癌组织内LVD与临床病理参数的关系
病理分级：高、中、低分化三组的癌组织内LVD差异有高度统计学意义(H=23.602，P=0.000)；经Nemenyi法两两比较：各组之间差异均有高度统计学意义(χ2值分别为18.41、12.76、504.52，均P<0.005)。淋巴转移：有转移组的癌组织内LVD明显高于无转移组，差异有高度统计学意义(近似t=-4.340，P=0.000)，而与年龄、FIGO分期、肿瘤直径、间质浸润深度、有无癌栓等无关(均P>0.05)，见表1。
2.2宫颈浸润鳞癌癌旁LVD与临床病理参数的关系
病理分级：高、中、低分化三组的癌旁LVD差异有高度统计学意义(H=13.762，P=0.001)；两两比较：高、低两组之间的差异有高度统计学意义(χ2=12.18，0.005
表1 宫颈浸润鳞癌组织内及癌旁LVD与临床病理参数的关系
注：P为Wilcoxon秩和检验；﹡P为t检验；﹟P：Kruskal-Wallis H检验
3 讨论
宫颈癌早期转移以淋巴转移为主。随着淋巴管内皮细胞特异性标志物的发展和淋巴内皮细胞分离、培养技术的改进，淋巴管在宫颈癌转移中的作用正逐渐成为研究热点。D2-40是一种IgG2a型新型鼠单克隆抗体，能识别表达在人类滤泡树突状细胞的黏液性跨膜糖蛋白：Podoplanin。能在福尔马林固定、石蜡包埋组织和实体瘤淋巴管密度研究中特异性识别淋巴管[7]。
3.1 宫颈鳞癌中淋巴管分布的意义
本实验中，我们用D2-40单克隆抗体标记淋巴管，发现D2-40染色阳性淋巴管呈棕褐色，有一个扩大、缺乏红细胞的管腔，癌栓可在管腔内被观察到；管壁通常是不规则的，由单层内皮细胞构成，每个细胞含有一个大的、挤出的核。相反，血管不着色，管腔内含大量红细胞，管壁通常是厚、规则的，并包含扁平核的内皮细胞。这与Gombos等[7]的研究一致，说明D2-40单克隆抗体对淋巴管特异性强。另外，癌栓多位于淋巴管内，反映早期宫颈癌以淋巴转移为主。切片中可见癌细胞浸润D2-40阳性淋巴管；管腔内癌栓表面可见D2-40阳性淋巴管内皮细胞的现象，推测可能的原因是癌细胞在浸润淋巴管时，淋巴管的内皮细胞可能被附着癌栓上，使管腔内癌栓表面可见D2-40阳性淋巴管内皮细胞。目前肿瘤内是否有淋巴管报道不一，大多数人认为肿瘤内无淋巴管存在，仅在癌边缘及癌旁组织中发现毛细淋巴管；但少数人研究发现肿瘤内存在淋巴管。本研究中宫颈浸润鳞癌组织内存在淋巴管，我们认为这可能与不同肿瘤的组织类型有关。我们发现瘤内淋巴管呈闭锁、扁平、裂隙状，而大多数瘤周淋巴管呈扩大、膨胀、不规则状。推测可能由于肿瘤细胞快速增殖致肿块增长迅速，使新形成的淋巴管处于高基质静水压下，导致癌组织内的淋巴管闭锁呈扁平、裂隙状；同时由于瘤周组织结构松散、管壁薄，微淋巴管容易受到肿瘤细胞侵蚀而损害其完整性，导致癌旁淋巴管呈扩大、膨胀、不规则状[8]。
3.2 宫颈浸润鳞癌癌组织内LVD及癌旁LVD与临床病理参数的关系
3.2.1 两者之间的共性本研究结果显示，宫颈浸润鳞癌组织内及癌旁LVD均明显高于正常宫颈组织，且均与淋巴转移有关。提示可能在宫颈鳞癌细胞分泌的淋巴管生长因子VEGF-C/D的调节下，淋巴内皮细胞经过增殖、迁移形成新的管腔。新形成的淋巴管与正常生理条件下的淋巴管结构相似，但数量更多、管壁更薄、渗透性更强，这些特征有利于肿瘤细胞转移。癌组织内的淋巴管可能在肿瘤生长早期当间质静水压尚未高到可阻塞它时，为肿瘤细胞转移提供直接途径；而更多膨胀的癌旁淋巴管为瘤细胞转移至区域淋巴结进一步提供途径[3，8]。癌组织内及癌旁LVD均明显高于正常宫颈组织，还提示新生淋巴管形成可能与宫颈癌的发生有关。我们发现癌组织内及癌旁LVD均与病理分级有关，中低分化组明显高于高分化组。推测可能的原因是中、低分化的宫颈鳞癌细胞恶性程度更高 ......
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