HPLC法同时测定消炎片中绿原酸和秦皮乙素的含量(2)
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2.4 精密度实验
取对照品溶液(浓度：绿原酸10.06 μg/ml，秦皮乙素25.55 μg/ml)，重复进样5次，每次5 μl，测得绿原酸的峰面积值的RSD为0.5%(n=5)；秦皮乙素峰面积值的RSD为0.2%(n=5)，结果表明仪器精密度良好。
2.5 稳定性实验
精密称取样品适量，按“2.2.1”项下的方法制备供试品溶液，分别在0、2、4、8、12、16、24 h，重复进样，每次10 μl，测得绿原酸和秦皮乙素峰面积的RSD分别为0.4%和0.3%(n=7)，结果表明样品在24 h内稳定。
2.6 重复性实验
取同一批样品(批号：20090103)，按“2.2.1”项下的方法制备5份供试品溶液，分别测定色谱峰面积，绿原酸和秦皮乙素的平均含量分别为0.182 mg/片和0.498 mg/片，RSD分别为0.4%和0.6%(n=5)，结果表明本法重复性良好。
2.7 回收率实验
精密称取已知含量的样品(批号：20090103)约0.8 g，6份，分别置50 ml量瓶中，分别精密加入对照品溶液：绿原酸对照溶液(0.136 6 mg/ml)各2.0 ml，秦皮乙素(0.249 2 mg/ml)各3.0 ml，加50%甲醇溶液适量，超声30 min，静置至室温，用50%甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，进样10 μl，结果绿原酸和秦皮乙素平均回收率分别为98.99%(RSD=0.2%，n=6)和98.92%(RSD=0.5%，n=6)，结果见表1。
表1 回收率试验测定结果
2.8 样品含量测定
取3批不同厂家的样品，按“2.2.1”项下的方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定峰面积，用外标法以峰面积计算，结果见表2。
3讨论
3.1 测定波长的选择
本法通过分别取两种对照品适量，用流动相稀释至一定浓度，照紫外分光光度法，在200~700 nm波长范围内扫描，结果绿原酸和秦皮乙素的最大吸收波长分别是328 nm和353 nm，故将测定波长确定为328 nm。
3.2 色谱条件的考察
为了在相对较短的时间内获得满意的分离效果，故采用梯度洗脱，色谱柱选用250 mm的长柱，流动相开始采用磷酸盐缓冲液-甲醇，绿原酸和秦皮乙素分离效果不理想，采用乙腈和磷酸溶液的梯度洗脱既缩短了分离时间，又取得了较好的分离效果。绿原酸见光易分解[5]，试验中全部使用棕色瓶。
3.3 提取方法的考察
在实验过程中考察了分别以100%、75%、50%甲醇、75%乙醇作溶剂超声提取30 min，结果表50%甲醇提取效果好，与文献报道相同[6]。又以50%甲醇为提取溶剂，考察了超声10、20、30、40、50 min提取情况，结果表明超声30 min提取完全。
本品的现行标准水平较低，仅有鉴别，这给质量监测带来一定的难度，也很难保证中药“安全、有效、质量可控”，本法的建立对现行标准是有效的补充和提高。
[参考文献]
[1]国家药典委员会.卫生部药品标准(中药成方制剂)[S] ......
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