异莲心碱对D-半乳糖致衰老小鼠抗氧化作用的研究(2)
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1.2 方法
1.2.1 实验动物分组及给药将50只小鼠适应性喂养一周后随机分为5组：空白组、模型组、异莲心碱高剂量组、异莲心碱低剂量组和维生素C对照组，每组10 只。除空白组外，其他组每日腹腔注射D-半乳糖100 mg/kg(体重)，空白组注射同剂量的生理盐水，同时，维生素C对照组每日腹腔注射20 mg/kg(体重)的维生素C，异莲心碱高、低剂量组每日腹腔注射10、20 mg/kg(体重)进行实验干预，持续42 d后处死小鼠，测定各项生化指标[5]。
1.2.2 生化指标测定于末次给药后12 h，称量小鼠体重。眼眶取血，4 000 r/min离心15 min，分离血清，24 h内检测血清SOD、GSH-Px活性及MDA含量。解剖小鼠，迅速取出肝脏，生理盐水冲洗后用滤纸吸去水分，称重后计算肝脏指数，结果表示为器官重量(mg)/小鼠体重(g)。取 0.3 g肝组织，剪碎后置于玻璃匀浆器中，加9倍体积预冷生理盐水，制成 10%(W/V)的肝组织匀浆，3 000 r/min离心10 min，取上清液测定肝脏SOD、GSH-Px活性及MDA含量。血清和肝脏中SOD、GSH-Px活性及MDA含量均按试剂盒说明书测定。
1.3 统计学方法
数据以均数±标准差(x±s)表示，组间比较采用t检验。
2 结果
2.1 异莲心碱对小鼠体重及肝脏指数的影响
由表1 可以看出，D-半乳糖诱导氧化损伤模型组小鼠体重和肝脏指数均明显低于空白组(P<0.01)，说明造模成功。与模型组相比，异莲心碱低、高剂量组和Vitamin C对照组小鼠体重和肝脏指数显著升高(P<0.05或P<0.01)，表明异莲心碱具有较显著的拮抗体重和肝脏指数降低的作用。
表1 异莲心碱对小鼠体重及肝脏指数的影响(x±s)
Tab.1 Effects of Isoliensinine on body weight and liver index of D-galactose-induced aging mice (x±s)
注：与模型组比较，aP<0.05，bP<0.01
2.2 异莲心碱对小鼠血清SOD、GSH-Px活性及MDA含量的影响
由表2 可知，模型组小鼠血清SOD、GSH-Px活性均显著低于空白组(P<0.01)，模型组小鼠血清MDA含量显著高于空白组(P<0.01)，说明造模成功。与模型组相比，异莲心碱高、低剂量组和维生素C对照组小鼠血清SOD、GSH-Px活性均显著升高，MDA 含量降低，均具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。
2.3 异莲心碱对小鼠肝脏组织SOD、GSH-Px活性及MDA含量的影响
由表3 可知，模型组小鼠肝脏组织SOD、GSH-Px活性均显著低于空白组(P<0.01)，模型组小鼠肝脏组织MDA含量显著高于空白组(P<0.01)，说明造模成功。与模型组相比，异莲心碱高剂量组和维生素C对照组小鼠肝脏组织SOD、GSH-Px活性均显著升高，MDA 含量降低，差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)，异莲心碱低剂量组对SOD明显升高，但对GSH-Px活性的影响与模型组比较差异无统计学意义。
表3 异莲心碱对小鼠肝脏组织SOD、GSH-Px活性
及MDA含量的影响(x±s)
Tab.3 Effects of Isoliensinine on activities of SOD, GSH-Px and MDA content in liver tissue of D-galactose-induced aging mice (x±s)
注：与模型组比较，aP<0.05，bP<0.01
3 讨论
随着年龄的增长，生物体内产生的防御自由基的抗氧化剂或酶类物质如SOD、GSH-Px活力逐渐下降，过剩的自由基可对细胞组织的生物大分子化学结构发生破坏性反应，当损伤程度超过修复能力时，组织器官的功能就逐步退化，表现出衰老的特征[6]。根据衰老的代谢学说建立D-半乳糖衰老模型是一种亚急性衰老动物模型[7]。青年小鼠长期连续注射大剂量D-半乳糖后，由于其代谢产物半乳糖醇不能被进一步代谢而堆积在细胞内，影响正常渗透压，导致细胞肿胀，功能丧失和代谢紊乱，最终导致衰老的发生。D-半乳糖致氧化损伤模型动物的多种组织病理变化符合自然衰老时出现的症状，这一过程与机体的自然衰老过程相似，是衰老研究中常用的一种衰老实验动物模型[8-9]。
SOD 和GSH-Px均属抗氧化酶类，在正常生理条件下，SOD 作为体内清除自由基的关键酶，通过清除H2O2、·OH和O2-，从而保护细胞免受氧自由基损伤，故检测SOD活性高低可间接反映机体清除自由基、保护细胞免受自由基损伤的能力[10]。GSH-Px是机体一种抗氧化的重要酶，它特异地催化还原型谷胱甘肽(GSH)对过氧化物的还原反应，其作用在于阻断由过氧化物引发的自由基对机体的损害，保护细胞膜免受过氧化的损伤[11]。MDA 是机体内脂质过氧化产物之一，其含量能间接反映机体组织细胞的脂质过氧化程度。大量实验表明，衰老时MDA 水平显著升高[12]。
本实验研究发现，异莲心碱能够显著提高衰老小鼠体重和肝脏指数，说明其可抑制衰老小鼠机体器官退化和萎缩；异莲心碱能够不同程度增强小鼠血清和肝组织的SOD和GSH-Px活性、降低MDA 含量，表明异莲心碱可提高抗氧化酶活力，抑制机体脂质过氧化，有效地拮抗自由基损伤所致的衰老小鼠的衰老过程。
综上所述，异莲心碱具有延缓衰老和抗氧化作用，其机制可能与清除氧自由基和活性氧，增强机体抗氧化酶活力有关。
[参考文献]
[1]张帆,王嘉陵,钱家庆.异莲心碱抗实验性心律失常作用及对豚鼠心肌动作电位的影响[J].中草药,2000,31(10):753-755.
[2]徐俊英,彭佳林,王嘉陵.异莲心碱对实验性脑缺血损伤的保护作用[J].中国医院药学杂志,2005,25(11):1026-1029.
[3]王辉,孙春艳,刘刚.异莲心碱的体外抗氧化活性[J].中国生化药物杂志,2005,26(1):21-23.
[4]王辉,杨柳,杨俊.异莲心碱对大鼠肝匀浆脂质过氧化的影响[J].中国医院药学杂志,2005,25(5):402-404 ......
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