间隙连接基因Cx32在肝细胞癌中的表达意义(2)
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图 1 肝癌组织、癌旁组织及正常肝组织的Cx43蛋白Western blot检测
表1 各组间Cx32蛋白Western blot检测产物灰度值比较
注：与正常肝组织比较，※P<0.01；与癌旁组织比较，*P<0.01
2.2 Cx32mRNA在HCC组织、癌旁组织及正常肝脏中的表达
见图2、表2。灰度扫描分析提示：各组总体均数方差齐，组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。说明HCC中Cx32mRNA水平较癌旁组织以及正常肝组织无明显差别。
1.阴性对照；2.正常肝组织；3.癌旁组织；4.HCC组织；
M:100 bp DNA ladder Marker
图2 Cx32mRNA PT-PCR产物6%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳
表2 各组间Cx32/β-actin PCR产物灰度值比较
3 讨论
Cx32是主要表达在肝脏组织中间隙连接蛋白。研究表明Cx32与HCC发生的关系有以下几点：①Cx32基因编码缺失，导致肝脏内GJIC减少，促进二乙基亚硝胺的致癌作用[1]；②Cx32基因敲除后使HCC发生率增加[2]；③Cx32蛋白在细胞浆中的分布异常促进HCC的进展[3]。本实验对HCC、癌旁组织和正常肝组织中Cx32蛋白进行检测，发现人类HCC组织中Cx32蛋白表达水平较后两者明显降低，而癌旁组织和正常肝组织中该蛋白无明显差异，提示HCC中Cx32蛋白表达的减少可能是HCC发生的重要机制之一。
HCC中Cx32mRNA水平正常，提示HCC的Cx32蛋白缺失，可能与Cx32基因在翻译，或蛋白质的加工修饰过程异常相关。Cx32基因表达受抑，导致GJIC异常可能与Cx32基因突变、Cx32mRNA表达减少和(或)表达异常、Cx32蛋白磷酸化异常相关。①Cx32基因突变：Cx32基因的突变情况很少见。Krutovskikh等[4]对20例HCC患者进行研究，发现肝组织中无Cx32基因的突变。Omori等[5]在由EHEN诱导产生的大鼠HCC中发现了在220密码子处产生了G→A的置换突变，导致了组氨酸代替了精氨酸，但此种错义突变并未损害Cx32形成GJIC的能力。因此，Cx32的基因突变未在HCC的发生中起作用。②Cx32mRNA表达减少和(或)表达异常：由苯巴比妥所致的大鼠HCC中，Cx32mRNA水平明显下降[6]，人类胃癌组织中其表达水平亦下降，并与其细胞成熟状态相关。但也有报道[7]指出，大鼠和人类HCC研究中Cx32mRNA与正常肝组织和癌旁组织相比较未发现差异有统计学意义，本实验结果与之一致。Cx32mRNA表达水平在肿瘤中的这两种截然相反的结果可能与DNA甲基化和细胞特异性转录因子等因素有关。③Cx32蛋白磷酸化异常：在HCC内信号转导研究中，人们发现Cx32蛋白酪氨酸磷酸化作用与GJIC功能的抑制相一致。亦有报道指出表皮生长因子能激活数种细胞系中的MAPK路径，使Cx32蛋白磷酸化而抑制GJIC功能[2]；通过使用MAPK抑制剂(PD98059)抑制MAPK通路可使肝细胞中的GJIC恢复。同时，在缺失Cx32表达的恶性肿瘤中发现MAPK(p44/Erk1，p42/Erk2)和JNK/SAPK/AP1信号表达水平明显增高[8]。此外，Cx32蛋白磷酸化调节也可能与多种蛋白激酶、生长因子受体等多种信号的参与有关。本实验观察到Cx32蛋白在HCC中明显降低，而Cx32mRNA水平无显著改变，提示HCC中Cx32蛋白缺失可能是Cx32基因在翻译或蛋白质的加工修饰过程中异常所致。这些磷酸化调节的异常可能使Cx32蛋白出现装配组合改变，无法形成有效的GJIC。同时，Cx32蛋白降解异常，使GJIC正常功能减弱，肿瘤细胞能逃避机体的免疫监视和生长控制。总之，HCC中Cx32蛋白减少及其磷酸化机制仍有待进一步研究。
[参考文献]
[1]Event M, Ott T, Achim T. Morphology and morphometic investigation of hepatocellular preneoplastic lesions and neoplasms in connexin32-deficient mice [J]. Carcinogenesis,2002,23(5):697-703.
[2]King TJ, Lampe PD. Mice deficient for the gap junction protein Connexin32 exhibit increased radiation-induced tumorigenesis associated with elevated mitogen-activated protein kinase (p44/Erk1, p42/Erk2) activation [J]. Carcinogenesis,2004,25(5):669-680.
[3]Kawasaki Y, Omori Y, Li Q, et al. Cytoplasmic aberration of connexin32 expands cancer stem cell population in human HuH7 hepatoma cells by enhancing its self-renewal [J] ......
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