紫杉中紫杉烷和双黄酮类成分的薄层色谱鉴别(2)
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S1-银杏双黄酮， S2-金松双黄酮， 1~3：紫杉
图2 双黄酮类TLC鉴别
2.2 紫杉与松科、杉科、柏科植物枝叶的薄层色谱比较
取红松、水杉、侧柏、圆柏枝叶粉末各1 g，照“2.1.2供试品溶液制备”方法制备供试液，按“2.1.3测定方法”，将上述四种样品与各对照品溶液、紫杉供试品溶液分别点于同一硅胶G薄层板和聚酰胺薄膜上，分别进行紫杉烷类(图3-1)和双黄酮类(图3-2)的鉴别。
S 4 56 7 1 2 3
S-紫杉宁，1~3：紫杉，4~7：红松、水杉、侧柏、圆柏
图3-1 紫杉烷类TLC鉴别
S1 S2 5467123
S1-金松双黄酮；S2-银杏双黄酮；1~3：紫杉；4~7：红松、水杉、侧柏、圆柏
图3-2 双黄酮类TLC鉴别
图3 紫杉与松、杉、柏科植物枝叶的薄层色谱图
3 讨论
紫杉为枝叶类药材，含叶绿素较多，对待鉴定的脂溶性成分如紫杉烷二萜类干扰较大，因此薄层鉴别时难度较大，目前尚未有对其进行研究的相关报道，本研究对紫杉烷类薄层色谱鉴别进行色谱条件的优化，该法在供试液制备、展开剂选择及温度等方面为枝叶类药材减少叶绿素干扰及对含二萜类成分的中药进行TLC鉴别提供依据。
3.1 供试品溶液制备的考察
考虑到紫杉烷为热敏性物质，提取温度过高易变质，因此采用超声法简便快速，且不需加热，使目标成分提取充分。同时兼顾紫杉烷类和双黄酮类同时提取，溶剂分别选用甲醇、乙醇、丙酮和乙醇-乙酸乙酯超声提取[7]，试验中采用石油醚、中性氧化铝柱和活性炭吸附等常用的除叶绿素方法，但均较繁杂，且效果不理想。通过选用50%丙酮进行直接提取可以同时将紫杉烷类和双黄酮类成分提取出来，并且色素较少，易于鉴别。
3.2 展开剂的选择
曾根据文献考察二氯甲烷-甲醇[8]、正己烷-氯仿-乙酸乙酯-甲醇-三乙胺[9]两种展开系统，结果显示两种系统分离效果均不好，易拖尾，成点性差。因此在试验中根据溶剂极性参数(P′)和选择性参数，结合溶剂组成的优化方法对展开剂的组成进行了优化，考虑到紫杉烷类成分极性较小，所以选用石油醚(P′=0.01)和丙酮(P′=5.4)系统调节展开剂的极性，由于紫杉烷类化合物多包含羰基或酯基的结构，所以加入乙酸乙酯增强展开剂的选择性，更适合该类成分的展开，加入适当的甲醇用于控制拖尾。实验结果显示用该系统使目标化合物能得到较好的分离效果，成点性较好。
3.3 温度的考察
将紫杉烷类成分分别在室温(20℃)及10℃以下环境下展开，结果表明温度对成点性、分离度影响较大，温度高时，薄层板上各点拖尾严重，且Rf值不稳定，而在10℃以下展开斑点集中、圆整、稳定。
3.4 紫杉与松、杉、柏科植物枝叶的TLC区别
研究中发现，经采集干燥后紫杉与松、杉、柏科植物枝叶外形相似，本研究表明它们的紫杉烷二萜类成分相差较大，可以区别，黄酮类成分除水杉外也可区别。利用本方法可以将紫杉较好的区分于松科、杉科和柏科植物，为有效评价紫杉质量提供依据。
本文对东北红豆杉TLC鉴别进行研究，对红豆杉属其他植物如云南红豆杉、西藏红豆杉、南方红豆杉和中国红豆杉的薄层色谱鉴别提供参考，有关这些红豆杉之间鉴别的一致性或差异性还有待进一步研究。
[参考文献]
[1]江苏新医学院.中药大辞典下册[M].上海:上海人民出版社,1997.
[2]李勇,丛斌,董玫.东北红豆杉中紫杉烷类化合物抑制人肺癌细胞增殖活性的研究[J]. 肿瘤,2010,30(8):656-660.
[3]曹聪梅,李作平,史清文.东北红豆杉的化学成分和药理作用研究进展[J].天然产物研究与开发,2006,18(2):330-342,259.
[4]DUAN Rui-sheng, DONG Mei, WANG Wei-ping. Anti-oxidative Effects of Taxanes [J]. Nat Prod Res Dev,2010,(22):201-205 ......
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