高效液相色谱法测定鱼肝油乳剂中维生素A的含量(2)
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2.6 稳定性试验
取同一供试品溶液，室温放置，分别于0、0.5、1、2、4、8 h进样20 μl，测定维生素A峰面积。结果RSD为0.75%，表明样品溶液在8 h内稳定。
2.7 重现性试验
取供试品样品(批号分别为081105；081102；080202)，每批3份，共9份，依“2.2.2供试品溶液”项下方法制备供试品溶液，分别进样20 μl测定，RSD为0.58%，表明本法重现性良好。
2.8 回收率试验
取已知含量的复方鱼肝油制剂样品(081105)6份各4 ml，分别加入精密吸取浓度为0.1 mg/ml的维生素A醋酸酯对照品贮备液1.0 ml，按供试品溶液制备方法加入无水乙醇20 ml，振摇5 min后，精密加入环己烷25 ml，强力振摇15 min，静置使其分层；将无水硫酸钠铺至滤器，弃去水层，将环己烷层液体倒入滤器过滤，精密量取续滤液5 ml，置50 ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，充分摇匀，分别进样20 μl测定，计算回收率，结果显示其平均回收率为98.84%，RSD为0.75%，具体见表1。
表1加样回收率试验结果(n=6)
2.9 样品含量测定
分别取“2.7”中所述三批次复方鱼肝油制剂样品各3份，共9份，依法制备供试品溶液，分别进样20 μl测定含量，按外标法计算含量，详细结果见表2。
3 讨论
维生素A是第一个被发现，也是一种极其重要、极易缺乏的，为人体维持正常代谢和机能所必需的脂溶性维生素[4]。常见的检测维生素A的方法主要有比色法、紫外分光光度法、近红外光谱法和高效液相色谱法[5]。《中国药典》中对鱼肝油乳剂中维生素A的测定采用计算分光光度法[6]，测定前需将鱼肝油制剂进行皂化处理，而皂化的处理过程容易导致维生素A降解，且测定步骤繁琐，计算复杂。测量时，容易出现测量值，校正值的差与测量值的比值超过-15~3的范围，导致含量无法计算，且不同仪器间误差较大[5]。高效液相色谱的基本原理是将微量经过提纯的试样注入加样系统，在高压条件下，试样被流动相带入色谱柱内，按照样品所含物质在固定相与流动相之间的分配系数、分子极性的大小以及所带的电荷数的多少，经过固定相与流动相之间多次交换进行分离，通过检测器检测，根椐检测获得的色谱结果峰高或峰面积可以精确地计算出所测物质的含量，方法简便，准确。
本品为复合鱼肝油制剂，成分复杂，干扰成分较多，因此，在测定含量时我们对维生素A采用无水乙醇和环己烷提取，以甲醇-水(95∶5)为流动相，用流动相稀释维生素A对照品纯品，置紫外分光光度计下扫描，测得维生素A最大吸收波长为325~328 nm，故本实验采用326 nm作为检测波长。采用HPLC法测定复合鱼肝油制剂中维生素A的含量，可有效排除干扰，结果准确，重现性好，精密度高，可用于控制本品的质量。
[参考文献]
[1]冯小燕,陈贻骥.维生素A在分泌型免疫球蛋白A生成中的作用[J].儿科药学杂志,2009,15(4):56-59.
[2]闵秀全,郑伟清,吴霞,等.维生素A作为免疫佐剂用于提高儿童免疫功能的临床研究[J].中国妇幼保健,2010,25(23):3278-3280 ......
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