LC/MS/MS测定犬血浆中氯米帕明浓度及体内药动学(2)
 |
| 第1页 |
参见附件(1955KB，3页)。
2.2.2内标溶液的配制 精密称取盐酸异丙嗪10 mg，置于10 ml容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，作为储备液。再将储备液用乙腈稀释成浓度为200 ng/ml的内标溶液，置4℃冰箱内保存待用。
2.3 血浆样品预处理
向500 μl血浆中分别加入50 μl内标溶液(200 ng/ml，PMZ溶液)、100 μl乙腈和500 μl碳酸钠溶液(1 mol/L)，混匀，再加3 ml正己烷，涡流混合1 min，往复振荡15 min(240次/min)，离心15 min(4 000 r/min)，分取上层有机相于另一试管中，40℃氮气流下吹干，残留物加入200 μl流动相溶解，涡流混合，取20 μl进行LC/MS/MS分析。
2.4 线性相关性试验
取空白血浆500 μl置于具塞玻璃试管中，分别加入100 μl氯米帕明系列标准溶液，加入内标溶液(异丙嗪200 ng/ml)50 μl，照“2.3”项下方法操作，进行测定，记录色谱图，以主药与内标峰面积比(Y)为纵坐标，血药浓度(C，ng/ml)为横坐标，绘制标准曲线，得到线性方程为：Y=1.4C+0.023 9，r=0.991 9(n=3)，定量下限为1 ng/ml。
2.5 精密度与准确度试验
取空白血浆500 μl，分别加入氯米帕明标准溶液，使血浆样品浓度分别为1、30、300 ng/ml，照“2.3”项下方法操作，进行测定。每一浓度进行6个样本的分析，连续测定3 d，计算方法的精密度和准确度。结果显示，血浆中低、中、高精密度分别为10.3%、4.9%、9.0%，准确度分别为98.1%、95.0%、92.4%。
2.6 提取回收率试验
取空白血浆500 μl，加入氯米帕明标准溶液，使血浆样品浓度分别为1、30、300 ng/ml，照“2.3”项下方法操作，残留物加150 μl流动相和50 μl内标溶液，涡旋溶解后，进样分析，求得待测物与内标物的峰面积比值；另取相同浓度的标准溶液150 μl和内标溶液50 μl，混匀后进样，求算待测物与内标物的峰面积比值，每一浓度进行6个样本的分析，计算提取回收率。见表1。
2.7 血浆样品稳定性试验
在空白血浆中加入氯米帕明标准溶液，使血浆药物浓度分别为1、30、300 ng/ml。分别考察血浆样品室温下放置6 h、样品置于-20℃下30 d、样品经历三个冷冻融化循环后以及样品提取处理后流动相溶解室温放置6 h的稳定性，结果显示，在上述条件下，血浆样品RSD均小于15 %，说明血浆样品在上述条件下稳定。
2.8 血浆样品采集
健康家犬(雄性)3只，口服氯米帕明片25 mg，给药后0.5、1、2、3、4、6、8、10、12、24、36、48、72 h后肢静脉采血2 ml置肝素管中，在4 000 r/min下离心10 min分离血浆，应用本文的分析方法，测定血浆样品中氯米帕明的浓度，得血药浓度-时间曲线(图3)。按照《中国药典》2005年版二部附录XIX B中“药物动力学数据处理”方法进行数据处理，Cmax、tmax采用实测值；消除速度常数k由lgC对t作图，曲线消除相(曲线尾段)数个试验点作直线，由直线斜率求算得；采用梯形法计算曲线下面积。达峰时间(tmax)为(2.33±0.58)h；达峰浓度(Cmax)、半衰期(t1/2)分别为(201.57±70.94) ng/ml及(16.39 ±3.08) h；AUC0-72、AUC0-∞分别为(1 822.18±206.00)(ng·h)/ml及(2 006.11±241.80)(ng·h)/ml。
3 讨论
本实验考察了在提取过程中以多种弱极性的提取溶剂进行提取，其中包括乙醚以及不同比例的乙醚-二氯甲烷、正己烷-二氯甲烷-异丙醇等。结果表明血浆样品经500 μl碳酸钠溶液(1 mol/L)碱化后，正己烷提取率最高，且在低、中、高各浓度下回收率稳定，线性和重现性好。考虑到使用单一溶剂可以简化样品处理过程，最终选定用正己烷作提取溶剂。但是它有一定乳化现象(提高提取溶剂和血浆样品的温度，最终解决乳化问题)，回收率约为70%。
氯米帕明溶解性好，在甲醇和乙腈中极易溶解。实验初，空白甲醇进样，出现类似氯米帕明的离子对信号，干扰氯米帕明的测定。改用空白乙腈进样，没有类似的干扰，因此使用乙腈作为溶剂。
[参考文献] ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件(1955KB，3页)。