复方首乌藤合剂微生物限度检查的验证
 |
| 第1页 |
参见附件(1999KB，3页)。
[摘要] 目的：确定可行的复方首乌藤合剂微生物限度检查法。方法：根据《中国药典》2010年版二部附录Ⅺ J微生物限度检查法常规法进行验证试验。结果：试验组的菌回收率均大于70%，控制菌常规法验证检出阳性菌，阴性菌未检出。结论：复方首乌藤合剂无抑菌作用，可用常规法进行微生物限度检查。
[关键词] 复方首乌藤合剂；微生物限度检查；验证
[中图分类号] R927.33 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2011)11(a)-076-03
Validation of microbial limit test method of Compound Caulis Polygoni Multiflori Mixture
ZHANG Ting, ZHENG Shaozhong, LIU Quanfang
Department of Pharmacy, the 175th Hospital of PLA (the Southeast Hospital Affiliated to Xiamen University), Fujian Province， Zhangzhou 363000, China
[Abstract] Objective: To establish a method for the microbial limit test of Compound Caulis Polygoni Multiflori Mixture. Methods: A validation of microbial limit test method was conducted in accordance with routine method in the appendix of Chinese Pharmacopoeia (2010 edition two parts Ⅺ). Results: The recoveries of test organisms by routine method were more than 70%, the test organisms were detected in the control bacteria test and were not detected in the negative control bacteria test. Conclusion: The Compound Caulis Polygoni Multiflori Mixture has no inhibitory effect, and conventional method can be used in microbial limit test.
[Key words] Compound Caulis Polygoni Multiflori Mixture; Microbial limit test; Validation
微生物限度检查是药品安全性检查的重要项目，目前在国外也越来越受到重视，每版药典收载的品种也越来越多。复方首乌藤合剂是我院自制的中成药口服液，有滋阴清肝、清心安神作用，主要用于神经衰弱性失眠、眩晕及脑外伤性头痛、头昏等。《中国药典》2010年版规定建立微生物限度检查法时，应对该方法进行验证，以确定该方法的可行性。笔者依据《中国药典》2010年版二部附录[1]对该品种进行了菌落计数和控制菌检查方法的验证[2]。
1 仪器与试药
1.1 仪器
DG-2B多功能恒温箱(上海医疗器械厂)；HWS-400型恒温恒湿箱(上海精宏实验设备有限公司)；LDZX-40SCI型立式自动电热压力蒸汽灭菌器(上海申安医疗器械厂)；101-2A型数显式电热恒温干燥箱(上海阳光实验仪器有限公司)。
1.2 药品
复方首乌藤合剂(解放军第一七五医院制剂室，40 ml/瓶，批号：100609、100623、100721)。
1.3 试验用菌株
大肠埃希菌(escherichia coli)[CMCC(B)44102]、金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus)[CMCC(B)26003]、枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)[CMCC(B)63501]、黑曲霉(aspergillus niger)[CMCC(F)98003]和白色念珠菌(candida albicans)[CMCC(F)98001]，以上菌种均购于厦门市药品检验所，金黄色葡萄球菌为第三代，大肠埃希菌为第二代，其余菌均为第四代。
1.4 培养基
营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、营养肉汤培养基、改良马丁琼脂培养基、胆盐乳糖培养基、MUG培养基，以上培养基均购于广东环凯微生物科技有限公司。
1.5 稀释液
pH 7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液，购于广东环凯微生物科技有限公司。
2 方法与结果
2.1 菌落计数方法的验证[3]
2.1.1 供试液的制备
用pH 7.0的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液将复方首乌藤合剂稀释成为1∶10的供试液，充分混匀备用。
2.1.2 菌液制备
2.1.2.1 取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物用接种棒接种至营养肉汤培养基中，于(35±1)℃培养18～24 h。
2.1.2.2 取白色念珠菌的新鲜培养物用接种棒接种至改良马丁琼脂培养基中，于(25±1)℃培养24～48 h；
上述培养物均用灭菌生理盐水制成每毫升含菌数小于100 cfu的菌悬液，做活菌计数用。
2.1.2.3 取黑曲霉新鲜培养物接种至改良马丁琼脂斜面培养基中，于(25±1)℃培养5～7 d，使黑色的霉菌孢子大部分覆盖培养基斜面为宜，加入5 ml含0.05%(ml/ml)聚山梨酯-80的灭菌生理盐水并轻轻振摇洗脱下霉菌孢子，过滤孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%(ml/ml)聚山梨酯-80的灭菌生理盐水制成每毫升含菌数小于100 cfu的菌悬液，做活菌计数用。
2.1.3 菌落计数方法的验证操作
试验组：分别吸取上述制备好的1∶10供试液1 ml注入平皿中，再分别加入上述制备好的的5种菌的菌悬液各1 ml，每种菌平行制备2份，立即倾注营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基。
供试品对照组：分别吸取上述制备好的1∶10供试液1 ml注入平皿中，立即倾注营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基，每种培养基平行制备2份，以测定供试品的本底菌数。
菌液组：取上述制备好的5种菌的菌悬液1 ml注入平皿内，每种菌平行制备2份，立即倾注营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基，测定所加的试验菌数，并计算回收率。回收率公式为回收率(%)＝(试验组菌落计数-供试品对照组菌落计数)/菌液组菌落计数×100%。
以上营养琼脂培养基置30～35℃培养48 h ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件(1999KB，3页)。