HPLC法测定消渴降糖胶囊中槲皮素的含量(2)
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2.6 盐酸加入量的选择
取装量差异下本品内容物，研细，分别称取4份，每份约0.5 g，除盐酸加入量分别为1、3、5、6 ml外，其余同含量测定方法。提取含量分别3.55、3.65、4.00、3.99 mg/g，结果表明，盐酸加入量为5 ml，即可水解完全。
2.7 溶液的制备
2.7.1 供试品溶液的制备 取装量差异下本品内容物，研细，取约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇50 ml，密塞，称定重量，超声处理30 min(500 W，59 kHz)，放冷至室温，密塞，再称定重量，用80%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25 ml，加盐酸5 ml，水浴加热水解1 h，取出，立即冷却，转移至50 ml量瓶中，用80%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
2.7.2 对照品溶液的制备 精密称取经120℃干燥4 h后的槲皮素对照品适量，加80%甲醇制成每毫升含20 μg的溶液，即得。
2.7.3 阴性样品的考察 在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μl，进样测定。结果表明，供试品中槲皮素可达到基线分离，峰保留时间适中，因此该分析条件可行。由于本品为单味制剂，且无辅料，故阴性样品即为溶剂，在上述色谱条件下，精密吸取80%甲醇10 μl，注入液相色谱仪，结果在槲皮素峰相应的位置上，无色谱峰出现，表明阴性样品对本品含量测定无干扰 。
2.8 线性关系的考察
精密称取槲皮素对照品2.8 mg，置100 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，制成每毫升含28 μg的溶液，分别精密吸取2、4、8、12、16、20 μl，注入色谱仪，测定，以槲皮素的量(μg)为横坐标，以峰面积为纵坐标，计算回归方程和相关系数，得线性回归方程为Y=40 103.2X-561.4，相关系数r值为0.999 8。结果表明，槲皮素对照品进样量在0.056～0.560 μg范围内与峰面积呈良好的线性相关。
2.9 精密度试验
取一定浓度(26 μg/ml)的对照品溶液，连续进样5次，考察仪器精密度，精密度RSD=0.9%。结果表明，仪器精密度良好。
2.10 稳定性试验
取同一样品，在不同时间点进样测定，以测定结果的RSD来确定在一段时间内供试品溶液是否稳定，10 h稳定性试验结果显示，其RSD=1.10%。表明供试品溶液在10 h内保持稳定，能保证测定的时间要求。
2.11 重复性试验
取同一批样品5份，按标准正文所述方法测定，测定各份含量，以考察测定方法的重复性，结果测得5份样品含量的变异系数RSD=1.30%，表明方法的重现性良好。
2.12 加样回收率试验
取已知含量的同一批样品(含量为3.99 mg/g)6份，分别精密加入槲皮素对照品溶液1、1、2、2、3、3 ml(对照品溶液浓度为510 μg/ml)，按标准所述方法测定含量，计算回收率。结果表明，本方法的平均回收率为98.7%，RSD=0.90%。见表1。
3 讨论
实验研究表明，采用高效液相色谱法测定消渴降糖胶囊中槲皮素的含量，在设定的色谱条件下，重现性好，检测结果稳定可靠，可以作为产品质量控制的常规检测方法。
样品检测：取样品6批，照拟定的方法测定含量，6批样品平均含量为1.19 mg/粒，按80%计则为0.95 mg/粒,考虑生产过程每批产品质量有一定的差异性，建议拟定为消渴降糖胶囊每粒含番石榴叶以槲皮素(C15H11O7)计，不得少于0.80 mg。
在提取时间的研究中发现，超声仪频率和功率对样品溶液的制备有一定的影响，建议使用同功率频率的超声仪，保证槲皮素得以有效的提出。
消渴降糖胶囊制剂的原药材仅为番石榴叶的一种，收载于广西壮族自治区中药材标准《中药材》1990年版，该药材标准无含量测定项。在对制剂进行增加含量测定情况下，必须增加对番石榴叶药材中槲皮素的含量控制，方能保证药品质量。建议番石榴叶中增加槲皮素含量检测项 ......
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