反相高效液相色谱法测定根皮素溶解度
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[摘要] 目的：建立反相高效液相色谱法来测定根皮素含量的方法，测定其在不同溶剂中的溶解度。方法：采用RP-HPLC法，色谱柱为Inertsil ODS-3柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)，流动相为乙腈-0.20%磷酸(40∶60，V/V)，流速为1.0 ml/min，检测波长为286 nm。结果：在0.505~60.600 μg/ml浓度范围内线性关系良好，回归方程为Y=88.85X+0.222 1(r=0.999 8)；根皮素在醇中的溶解度较高。结论：本文所建立的根皮素HPLC含量测定方法，专属性强，灵敏度高，可用于根皮素溶解度的测定。
[关键词] 根皮素；溶解度；反相高效液相色谱法；含量测定
[中图分类号] R284.1 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2011)11(b)-033-02
Determination on the solubility of Phloretin by RP-HPLC
CHANG Min, WANG Qingwei, LIU Xinyou , ZHANG Tingting, LI Longfei
Department of Pharmacy, Tangdu Hospital of the Fourth Military Medical University, Shaanxi Province, Xi′an 710038, China
[Abstract] Objective: To establish a reversed-phase high performance liquid chromatographic (RP-HPLC) method for determination of Phloretin and determine the solubility in different solvents. Methods: RP-HPLC method with the inertsil ODS-3 column (4.6 mm×150 mm, 5 μm) was used. The detection wavelength was 286 nm, the flow rate was 1.0 ml/min, the mobile phase was acetonitrile-0.20% phosphoric acid (40∶60, V/V). Results: The results showed that the Phloretin had a good linear relationship when its concentration was between 0.505-60.60 μg/ml. The regression equation: Y=88.85X+0.222 1 (r=0.999 8). The solubility values of Phloretin in ethanol and propylene glycol were higher than that in other solvents. Conclusion: This method is simple, quick and accurate for the determination of Phloretin.
[Key words] Phloretin; Solubility; RP-HP LC; Determination
根皮素(phloretin，Ph)是存在于苹果、梨等水果及多种蔬菜汁液中的类黄酮化合物，含有多个酚羟基，具有极强的抗氧化活性[1]。根皮素具有多种生物活性，对细胞无序增生有抑制作用，是食品中的抗诱变因子，可用于皮肤癌及其他肿瘤的治疗，是一种潜在的肿瘤治疗药物[2]；对骨质疏松、心血管硬化、高血脂症、肥胖以及老年痴呆症等疾病具有预防和治疗作用[3]。目前其研究引起了广泛关注，本文通过建立测定根皮素含量的方法，并测定在不同溶剂中的溶解度，为根皮素的进一步研究奠定基础。
1 仪器与试药
Agilent 1200液相色谱仪(Agilent 1200泵、Agilent1200紫外检测器、Agilent 1200色谱工作站)；BP211D电子分析天平(德国Sartorius公司)；SHZ-B水浴恒温振荡器(上海跃进医疗器械厂)；TGL-16C型离心机(上海安亭科学仪器厂)。
根皮素对照品(第四军医大学药学院药物化学教研室制备，经质谱、红外检定，HPLC测定含量为99.3%)；根皮素原料(第四军医大学药学院药物化学教研室制备，含量为98.0%)；甲醇、乙腈均为色谱纯；乙醇、乙酸乙酯、氯仿、丙二醇、石油醚为分析纯；水为二次蒸馏水。
2 方法及结果
2.1 溶液的制备
精密称取10.00 mg根皮素对照品，置于10 ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，制备成1.00 mg/ml的根皮素母液，低温避光保存备用。取母液2 ml置于10 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，即得0.20 mg/ml的根皮素储备液。
2.2 色谱条件及系统适用性试验
色谱柱：Iinertsil ODS-3柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)；流动相为乙腈-0.20%磷酸(40∶60，V/V)；流速为1 ml/min；检测波长为286 nm；进样量为20 μl；温度为室温。在此色谱条件下，取适当浓度的根皮素对照品溶液进样测定，理论塔板数按根皮素峰计不低于1×104，对称因子为1.01，根皮素峰的保留时间为6.3 min，其杂质对主峰测定无干扰。见图1。
2.3 线性关系考察
精密量取根皮素对照品储备液于10 ml的容量瓶中，加甲醇稀释定容至刻度，摇匀即得浓度分别为0.505、2.525、5.050、10.100、20.200、40.400、60.600 μg/ml的系列标准溶液。按照“2.2”项下的色谱条件检测，记录峰面积，以峰面积(Y)对浓度(X)作图进行回归，得回归方程为Y=88.85X+0.222 1(r=0.999 8)，可见根皮素在0.505~60.600 μg/ml范围内呈良好的线性关系。
2.4 精密度考察
精密量取根皮素对照品储备液适量，加甲醇溶解并定量稀释成10.10 μg/ml的溶液1份，连续进样6次，测定峰面积，RSD为0.09%，结果表明，在该色谱条件下仪器精密度良好。
2.5 重复性考察
精密量取根皮素对照品储备液适量，加甲醇溶解并定量稀释成10.10 μg/ml的溶液6份，按照“2.2”项下的色谱条件检测，计算峰面积的RSD为0.78%，表明本法重复性良好。
2.6 稳定性考察
精密量取根皮素对照品储备液适量 ......
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