OVA-CdTe/ZnSe核壳量子点探针的制备及其应用(2)
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1.2.3 OVA-CdTe/ZnSe探针标记嗜碱粒细胞表面 IgE高亲和力受体FcεRI 分别于第0、14天对C57BL/6小鼠腹腔注射致敏液0.2 ml(0.08%的OVA 0.1 ml与等体积佐剂液态铝混合)致敏；第15天眼球采血，Percoll密度梯度离心法分离外周血BASO细胞。将BASO细胞于含有0.3%Triton-100的PBS作用10 min，0.01 mol/L PBS洗3次；于含有10%牛血清白蛋白(BSA)的PBS中封闭20 min。滴加OVA-CdTe/ZnSe探针(用含10%BSA的PBS稀释，对照滴加BSA-CdTe/ZnSe和CdTe/ZnSe)，置于湿盒中，37℃，30 min。先0.01 mol/L PBST洗3次，然后0.01 mol/L PBS洗3次；缓冲甘油封片。在激光共聚焦显微镜下成像，激发波长为488 nm。
2 结果
2.1 CdTe/ZnSe与OVA偶联效果的鉴定
CdTe/ZnSe及其与OVA偶联物的表面带有大量的羧基负电荷，在电场中会向正极泳动。图1为CdTe/ZnSe与OVA偶联物的电泳结果。如图2所示，在400~700 nm范围内，CdTe/ZnSe与OVA偶联前后的吸收光谱随波长变化不明显，而偶联后的荧光略有增强，且荧光峰位从628 nm红移至635 nm。
2.2 OVA-CdTe/ZnSe探针荧光示踪OVA特异性IgE-FcεRI复合物
在激光共聚焦显微镜视野下，能清晰观测BASO表面IgE-FcεRI复合物被OVA-CdTe/ZnSe探针标记后发出的红色荧光(图3-A)，而BSA-CdTe/ZnSe和CdTe/ZnSe因不能与细胞膜结合而无明显荧光(图3-B、3-C)。
3 讨论
QDs是一种由Ⅱ~Ⅵ族或Ⅲ~Ⅴ族元素组成的尺寸在1~100 nm之间稳定的微小晶粒，受激后可以发射荧光[6]。QDs的激发波长范围可以涵盖整个光谱，用同一波长的光可以激发不同的QDs，同时获得多种颜色荧光，方便用于多目标分子的多色标记，并且核壳结构QDs的表面经过修饰，其毒性要比有机荧光染料弱得多，很有希望成为新一代生物荧光标记物[7]。本研究合成的CdTe/ZnSe核壳QDs不需经过任何后续处理，荧光产率高达44%，并且ZnSe外壳及MSA的修饰大大提高了原始CdTe核的稳定性和生物相容性[4-5]。将CdTe/ZnSe与OVA共价连接后，复合物粒径和相对质量增大，因此导致电泳迁移率降低。同时与CdTe/ZnSe的电泳条带相比，CdTe/ZnSe与OVA偶联物的荧光条带展宽，是由于QDs与蛋白的偶联比不固定所致。CdTe/ZnSe与OVA偶联后会对CdTe/ZnSe的荧光性质产生一定的影响，其原因可能由于蛋白质对量子点的表面修饰，而且量子点经NHS作用与蛋白质经过共价连接，一个蛋白可能结合多个量子点，拉近量子点之间距离，导致量子点之间的偶极相互作用增强，使其Stokes位移增大，荧光峰位红移[8-9]。这些都表明CdTe/ZnSe与OVA偶联成功，经纯化后即获得OVA-CdTe/ZnSe探针。另外本研究采用Percoll密度梯度离心法分离OVA致敏小鼠的外周血BASO细胞，致敏小鼠所产生的OVA特异性IgE可与BASO细胞表面FcεRI结合，形成FcεRI-IgE复合物，而OVA又能与OVA特异性IgE结合，经OVA-CdTe/ZnSe探针标记后即可在BASO细胞表面形成了FcεRI-IgE-OVA-CdTe/ZnSe复合物，通过荧光成像可清晰显示出BASO细胞表面FcεRI的密度。由于OVA-CdTe/ZnSe探针识别OVA特异性IgE介导连接FcεRI，因此应用上不受物种限制，尤其在开发哮喘新动物模型的特异性IgE检测方面具有很好的应用价值。
[参考文献]
[1] Shin YS, Takeda K, Gelfand EW. Understanding asthma using animal models [J]. Allergy Asthma Immunol Res,2009,1(1):10-18.
[2] Kirschvink N, Reinhold P. Use of alternative animals as asthma models [J]. Curr Drug Targets,2008,9(6):470-484.
[3] Malveaux FJ, Conroy MC, Adkinson NF Jr, et al. IgE receptors on human basophils. Relationship to serum IgE concentration [J] ......
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