缺血对胰岛素抵抗大鼠Apelin mRNA、APJ mRNA表达的影响(2)
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1.3 观测指标及实验方法
1.3.1 心肌组织病理学分析 取心肌标本制作石蜡切片，HE染色后观察形态学改变。
1.3.2 Real-time PCR法测定心肌组织Apelin mRNA、APJ mRNA相对表达量 无菌条件下取心肌组织分切，置于-170℃液氮贮存罐中。操作步骤按试剂盒说明进行，实验步骤：总RNA提取物的获取、RNA的体外反转、Real-Time PCR扩增、实时检测和定量扩增的产物、ΔΔCt相对定量法。
1.4 统计学处理
采用SPSS 13.0软件进行统计分析，计量资料数据以均数±标准差(x±s)表示，采用单因素方差分析，两两比较用LSD法，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 光镜下心肌标本观察(HE染色)
对照组：心肌排列方向整齐，横纹可见。IR组：心肌细胞萎缩。IR+缺血组：心肌细胞萎缩，间质水肿，部分心肌呈波浪状、横纹消失，部分胞浆呈嗜酸性变。见图1。
2.2 Real-time PCR法定量
IR组Apelin mRNA、APJ mRNA相对表达量高于对照组(P<0.05)；IR组Apelin mRNA、APJ mRNA相对表达量显著高于IR+缺血组(P<0.05)；IR+缺血组Apelin mRNA、APJ mRNA相对表达量均低于对照组(P<0.05)。见表1。
3 讨论
Apelin-APJ系统众多的生物学效应与Apelin、APJ广泛的组织分布有关。Apelin既表现出舒张血管的效应，又表现出增强心肌收缩力、减少抗利尿激素的释放等效应，同时兼有抑制人类免疫缺陷病毒的入侵、促进水的摄入、调整生物节律及垂体激素释放等生物学效应[3-4]。有研究表明 Apelin由血管内皮细胞产生和释放，Apelin通过与其受体APJ结合发挥对心肌和血管内皮细胞的保护作用。在心力衰竭以及心肌重塑中Apelin及其受体APJ均有重要的调节作用。心脏和血浆中Apelin的表达在慢性心力衰竭的患者中随着心力衰竭程度加重而减少[5]。Apelin-APJ信号系统具有一定的拮抗肾素-血管紧张素-醛固酮系统激活的作用。
杨秀红等[6]用高脂饮食建立了胰岛素抵抗大鼠模型，证实了血清胰岛素水平是血清Apelin独立相关因素，机体在胰岛素抵抗状态下，血浆胰岛素水平与血浆中Apelin浓度升高呈正相关，这可能与在胰岛素抵抗状态下机体分泌 Apelin增加有关，Apelin、APJ可能作为一种保护性机制而发挥作用。这与本实验胰岛素抵抗大鼠心肌Apelin、APJ表达增加结果相似，Apelin、APJ可能通过拮抗胰岛素抵抗对心肌和血管内皮细胞起到保护作用。
Ouwens等[7]研究指出，高脂喂养的大鼠心肌中胰岛素信号传递途径中相关信号分子表达异常，从而引起大鼠心肌细胞的胰岛素抵抗、心功能低下。隋东虎等[8-9]研究证实在体外循环缺血再灌注机体胰岛素抵抗的同时，亦存在明显的心肌胰岛素抵抗现象，其程度随体外循环时间延长而增强，并与心功能障碍的发生密切相关。本实验给予异丙基肾上腺素导致胰岛素抵抗大鼠心肌缺血，可能进一步引起了其心肌胰岛素抵抗，导致心功能障碍，由于Apelin代偿不足或者由于Apelin拮抗肾素-血管紧张素-醛固酮系统的作用减弱，导致Apelin、APJ表达明显下降。因此，改善胰岛素抵抗对胰岛素抵抗的缺血性心血管疾病极为重要。
[参考文献]
[1] Tatemoto K, Hosoya M, Habata Y, et al. Isolation and characterization of a novel endogenous peptide ligand for the human APJ receptor [J]. Biochem Biophys Res Commun,1998,251(2):471-476.
[2] 陈世伟,张立实,张红敏,等.大豆异黄酮对胰岛素抵抗大鼠胰岛素敏感性及瘦素基因表达的影响[J].北京大学学报:医学版,2006,38(2):197-200.
[3] Ashley EA, Powers J, Chen M, et al. The endogenous peptide apelin potently improves cardiac contractility and reduces cardiac loading in vivo [J]. Cardiovasc Res,2005,65(1):73-82.
[4] Szokodi I, Tavi P, Foldes G, et al. Apelin, the novel endogenous ligand of the orphan receptor APJ, regulates cardiac contractility [J] ......
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