HPLC法同时测定双黄连胶囊中黄芩苷、黄芩素的含量(2)
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2.3 线性关系考察
取混合对照品贮备液摇匀，滤过，按上述色谱条件，分别进样1.0、2.5、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0 μl，以峰面积Y对浓度X(μg/ml)进行线性回归，得黄芩苷回归方程为Y=31.87X-7.453，r=1.000 0(n=7)，表明黄芩苷在6.072～151.800 μg/ml范围内线性关系良好；黄芩素回归方程为Y=48.27X+29.04，r=0.999 4(n=7)，表明黄芩素在2.124～53.100 μg/ml范围内有良好的线性关系。
2.4 精密度试验
取对照品溶液(浓度为黄芩苷60.72 μg/ml，黄芩素21.24 μg/ml)，重复进样5次，每次10 μl，测得黄芩苷峰面积值的RSD为0.2%(n=5)，黄芩素峰面积值的RSD为0.6%(n=5)，表明本方法精密度良好。
2.5 稳定性试验
精密称取样品适量，按“2.2.1”项下的方法制备供试品溶液，分别在0、2、4、8、12、16、24 h，重复进样，每次10 μl，测得黄芩苷和黄芩素峰面积的RSD分别为0.7%和0.9%(n=7)，表明样品在24 h内稳定。
2.6 重复性试验
分别精密称取同一供试品(批号：110101)5份，按“2.2.1”项下的方法制备供试品溶液，测量黄芩苷和黄芩素平均含量分别为76.04 mg/g和5.76 mg/g，RSD分别为0.9%和1.0%(n=5)，表明本方法重复性较好。
2.7 回收率试验
精密称取已知含量的样品(批号：110101，平均装量为0.395 4 g)约0.12 g，共6份，分别置100 ml容量瓶中，超声30 min，放置室温，用70%乙醇溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，精密吸取2 ml置10 ml容量瓶中，分别精密加入对照品溶液：黄芩苷对照溶液(231.8 μg/ml)和黄芩素(17.48 μg/ml)各1.0、1.0、1.0、1.0、1.0、1.0 ml，加甲醇稀释至刻度，用微孔滤膜滤过，进样10 μl，结果黄芩苷平均回收率为99.21%，RSD为0.5%(n=6)，黄芩素平均回收率为99.12%，RSD为0.6%(n=6)。见表1。
2.8 样品含量测定
取本品10片，精密称定，研细，按“2.2.1”项下的方法制备供试品溶液，每一批号的供试品平行制备3份。按上述色谱条件进样，按峰面积外标法测定含量。见表2。
3 讨论
3.1 测定波长的选择
文献[5]报道了检测波长为277 nm，本试验结果也表明在277 nm处黄芩苷和黄芩素分离效果好，能够满足试验要求，故将测定波长确定为277 nm。
3.2 色谱条件的考察
采用梯度洗脱，既能缩短分离时间，又能提高分离效果，采用150 mm短柱，黄芩素与相邻杂质峰分离不好，故选用250 mm的长柱，流动相分别先后考察了磷酸溶液-乙腈、磷酸溶液-甲醇的梯度洗脱，结果表明，采用磷酸溶液-甲醇的梯度洗脱分离效果好。
3.3 提取方法的考察
在实验过程中，先后采用了不同浓度的甲醇、不同浓度的乙醇超声30 min提取，结果表明70%乙醇超声30 min提取效率高，又比较了70%乙醇加热回流3 h提取与超声30 min的提取效果，结果表明，加热回流与超声提取无明显差异，最终选用70%乙醇超声30 min提取。
3.4 可用于定性鉴别
汉黄芩素也是黄芩的主要成分之一，本法也能实现汉黄芩素和杂质峰的有效分离 ......
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