服用营养素前后精子质量与丙二醛含量的变化(2)
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1 材料与方法
1.1 样品的采集与处理
1.1.1精液标本的收集 标本来源于2009年1月~2010年12月前来河北省计划生育科学技术研究院和青县计划生育技术服务站男科门诊就诊的患者176例，不育时间为1年以上，年龄22~35岁。受试者禁欲3~7 d，取样前3个月内未服用对精子有影响的食物或药物，6个月内未使用过激素，除去精液中白细胞异常增多、精索静脉曲张、输精管梗阻和严重的全身性疾病患者。手淫法收集精液，标本置37℃液化后作精液常规检查，余下精液3 000 r/min离心5 min，分离精浆用于MDA检测。按照世界卫生组织(WHO)的精液分析标准，选择精子活力(a+b)级<50%、精子活率<60%、精子形态畸形率>30%的患者。本试验受试者自身对照分为服用营养素前组和服用营养素后组。男性不育患者在服用营养素前半个月内进行2次精液常规检查，在服用营养素后的1、2、3个月末时各进行1次精液常规检查。
1.1.2 血样采集 取肘内侧静脉血，采血区皮肤依次经过碘酒、酒精棉球消毒，用一次性真空采血管取静脉血约2 ml，室温静置20 min 后, 2 000 r/min离心5 min，取血清于塑料具塞离心管中，-20℃保存备用。在服用营养素前7 d内和服用营养素后1个月末时各采血1次，进行MDA含量测定。
1.1.3 营养素服用法与用量 溢德生牌营养素胶囊由石家庄经济技术开发区利生技术开发有限公司提供，组成成分为维生素C、维生素E、锌和硒，规格0.25 g/粒。用法：口服，3粒/次，1次/d，饭后半小时后用温水送服。男性不育患者在第二次精液常规检测后开始服用，连续服用3个月。
1.2 方法
精液常规检验使用计算机辅助精子分析仪(CASA北京伟力精液分析系统)进行精液常规检查。MDA含量采用硫代巴比妥酸比色法测定，试剂盒均购自上海源叶生物科技有限公司，按说明书严格操作。
1.3 统计学方法
采用SPSS 10.0软件对数据进行统计分析，计量资料数据以均数±标准差(x±s)表示，服用营养素前后所有均数的比较采用配对t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1男性不育患者服用营养素前后精子参数各项均值比较
服用营养素后精子密度和精子活力明显高于服用前(P<0.05)，精子畸形率明显下降(P<0.05)，精子活率高于服用前，但差异无统计学意义(P>0.05)，表明服用营养素后精子质量有明显改善。见表1。
2.2服用营养素后血清和精浆中MAD水平
服用营养素后血清和精浆中MAD均明显降低，与服用前比较差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。
表2 服用营养素前后血清和精浆中MAD含量的变化(x±s，nmol/ml)
注：与服用营养素前比较，*P<0.05
3讨论
环境污染、铅镉含量升高、锌含量的降低[4]和病原体的侵袭等因素可使组织细胞产生过多的活性氧(ROS)和MDA，精子细胞对这些物质较为敏感，因此易受到损伤。精液中ROS主要来源有2种途径，白细胞和未成熟或形态异常的精子，ROS增高可使脂质降解产物MDA增多，MDA的增多标志着过氧化反应程度的增加。本试验排除了精液中白细胞增多、生殖器和全身性疾病因素的影响，结果表明，不育症患者MDA升高是造成精子质量下降的主要原因，也是男性不育的主要因素，营养素能使MDA含量迅速下降，精子质量迅速提高。
营养素中的维生素C存在于细胞外液中，抑制羟氢氧基、过氧化物和过氧化氢自由基，防止精子凝集，并且有助于维生素E重复利用。维生素E在细胞膜上发挥作用，抑制H2O2，保护精子膜免受脂质过氧化反应的攻击。锌参与组成过氧化物歧化酶，锌的缺乏还可影响下丘脑—垂体—性腺轴，使垂体分泌的促性腺激素减少，导致性腺功能减退，睾酮下降，精子数量减少，质量降低，蛋白质合成障碍，精子形成停滞，精子活动受到影响。硒是谷胱甘肽过氧化物酶复合体的必要组成部分，具有抗精子脂肪酸过氧化功能，它可协同维生素E发挥作用，使少精症、精子活力低下，严重精子畸形症得到改善。
ROS对精子的危害已成为公认的事实，使用营养素能够改善精液质量的文章已有人报道[5-6]。根据营养素的上述作用，其可能是通过拮抗ROS对精子细胞的损伤，使MDA含量下降，使精液质量得到改善。
本试验结果表明，营养素能够迅速、有效提高精子密度、精子活力和降低精子畸形率，MDA含量的减少表明脂质过氧化程度降低，从而对精子的损伤减少。
本研究结果为男性不育者和接受辅助生殖技术治疗前及欲求优生的男性补充营养素提供了依据，MDA的测定可作为男性不育症和过氧化反应增强的一个诊断指标。
[参考文献]
[1] 李文英.环境与精液质量的研究进展[J].国外医学:计划生育分册,2003,22(3):169-171.
[2] 刘容菊,李志凌.辅助生殖技术中预防活性氧对精子的损伤[J].生殖与避孕,2007,27(3):213-217 ......
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