非水毛细管电泳内标法测定麻黄中麻黄碱的含量(2)
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参见附件。
2.2 电泳条件
工作电压为20 kV，压力进样为10 Pa×10 s，电泳方向从正极到负极，柱温为25℃，检测波长为210 nm；运行缓冲液30 mmol/L醋酸铵和醋酸钠甲醇缓冲液(pH 7.0)；两次运行之间，必需用0.1 mol/L的NaOH溶液冲洗柱子3 min，再用醋酸铵甲醇溶液冲洗柱子3 min。各类型非水溶液在使用之前均用0.45 μm微孔滤膜滤过。
在上述测定条件下，记录麻黄碱标准品和麻黄样品测定的NACE色谱图。见图1。
2.3 方法学考察
2.3.1 线性关系考察 取1 g/L麻黄碱对照品储备液适量，置于1.5 ml塑料离心管内，置于室温至样品液全干，用电泳缓冲液稀释，分别制成浓度为200.000、100.000、50.000、25.000、12.500、6.250和3.125 mg/L的对照品溶液。各取100 μl对照品溶液，分别加入10 μl内标溶液，混匀，进行标准曲线的测定。以标准物浓度(Y)对标准物峰高与内标物峰高比值(X)进行回归分析，得麻黄碱回归方程：Y=0.027 75X+0.001 29，相关系数r=0.994 0。
2.3.2 最低检出浓度试验 取1 g/L的盐酸麻黄碱对照品溶液适量，置于1.5 ml塑料离心管内，置于室温至样品液全干，精密加入1 ml电泳缓冲液，置于微型旋涡混合仪上充分混匀，进样。当检测器显示的OD210值稳定后，启动电泳仪，在麻黄碱快去峰时，提前10 s随机记录麻黄碱在保留时间(tR)里的信噪吸收(absorbace，AU)最大值，按信噪比(S/N)约等于3，测得麻黄碱最低检出浓度为2 mg/L。
2.3.3 精密度试验 取0.1 g/L的麻黄碱对照品溶液100 μl，加入10 μl内标溶液，混匀，连续测定6次，测定结果显示RSD为2.05%，表明仪器精密度良好。选用1个样品，按样品处理程序进行操作，处理6份分别测定，测定结果显示，RSD为3.17%，表明本方法精密度良好。
2.3.4 加样回收率试验 分别选用含麻黄碱低和高的样品(含量约为0.1%和0.5%)，每一个样品制成2份，每份取100 mg粉末置于10 ml玻璃管中，其中一份准确加入与样品含量相当的麻黄碱对照品(即第一组加入0.1 g/L麻黄碱1 μl，第二组加入0.5 g/L麻黄碱1 μl，)，将其作为已知标准值的试验样品。而另一份样品作为空白对照样品。分别按样品处理程序进行操作，然后对4组单样进行测定，每份单样测定6次，结果显示本方法测定麻黄碱的回收率为97.47%～101.85%。测定结果见表1。
2.4 阴性空白试验
对麻黄碱的类似物鞣酸、黄酮苷、糊精和菊粉等按样品处理程序进行分析，未发现类似麻黄碱的未知物对毛细管区带电泳测定麻黄碱产生干扰。
2.5 麻黄碱含量测定
麻黄碱含量以重量百分比表示，麻黄碱含量=(A/B)×F/W×100%。其中，A为麻黄碱峰高，B为内标物峰高，F为麻黄碱回归方程中的斜率，W为1 ml样品溶液里草麻黄的重量(mg)。经测定，草麻黄中麻黄碱含量为0.83%。
3 讨论
3.1 内标物的选择
非水毛细管电泳内标法测定麻黄碱的关键，在于选择合适的内标物质，使各种因素变化引起的误差最小。内标峰不仅要与所有样品峰分开，而且与被测样品峰靠得越近越好。本方法选择品红作为内标，初步达到优化内标物的要求。
3.2 电泳缓冲液的选择
用非水毛细管区带电泳测定麻黄碱时，用0.1 mol/L的NaOH溶液冲洗柱子，能显著提高灵敏度。在电泳缓冲液里加入醋酸钠，能使基线更平稳，另外电泳缓冲液里必须加入醋酸铵，否则检测不到样品峰。
3.3 电流的选择
在相同条件下，非水系统电流远小于水溶液系统，因此允许使用较高的运行电压和较大的电解质浓度，达到更加快速、高效分离的目的。但电泳时的电流过大会使基线不稳定，甚至于断电，可以稀释缓冲液使电流降低。本文中的分析电流控制在60 μA，能得到平稳的基线。
3.4 电压的选择
分离电压越高，样品的迁移时间越短，但分离效果不如电压较低时好。分离电压太低，样品的迁移时间过长，电泳峰随之展宽使得峰形劣化，定量误差加大。经过试验比较和优化，选择10 kV作为分离电压。
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