黏蛋白1在低分化胃癌细胞中的表达及临床意义(1)
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[摘要] 目的：为探讨黏蛋白1(mucin1，MUC1)表达对胃癌发生、发展、转移的影响，笔者检测了MUC1在转化的人正常胃黏膜细胞系(GES-1)和低分化胃腺癌细胞系(BGC-823)中的表达情况，分析其表达的临床意义。方法：应用间接免疫荧光法检测MUC1在GES-1和BGC-823中的表达和定位。结果：MUC1在GES-1和BGC-823中的表达，差异有统计学意义(P<0.05)。结论：MUC1在肿瘤的发生、发展中发挥一定作用。MUC1可能与胃癌恶性的进展和转移有关，在胃癌的发生、发展过程发挥着重要作用。
[关键词] 胃癌；黏蛋白1；间接免疫荧光
[中图分类号] R735.2 [文献标识码] B [文章编号] 1673-7210(2011)12(b)-191-02
Expression of MUC1 in poorly differentiated gastric carcinoma cells and its clinical significance
ZHANG Bo, DI Ya'nan, PENG Deyin
Department of Digestive System, Aerospace General Hospital, Beijing 100076, China
[Abstract] Objective: To study the effect of the expression of Mucin 1 (MUC1) on occurrence and development of gastric cancer, the expression of MUC1 in normal cell lines of gastric mucosa (GES-1) and cell lines of poorly differentiated gastric adenocarcinoma (BGC-823) were researched, and then their clinical significance were analyzed. Methods: Indirect immunofluorescence was used to investigate the expression and location of MUC1 proteins in GES-1 and BGC-823. Results: The expressions of MUC1 were significantly different between GES-1 and BGC-823 (P<0.05). Conclusion: The MUC1 plays a role in occurrence, development and metastasis of gastric cancer. MUC1 may play an important role in the development and metastasis of gastric cancer.
[Key words] Gastric cancer; Mucin 1; Indirect immunofluorescence
胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，其发生、发展是一个多因素、多步骤的复杂过程。随着人们对肿瘤研究的不断深入，黏蛋白1(mucin1，MUC1)作为黏蛋白家族中的重要成员之一，在胃癌中的表达和转移中的作用也日益凸显出来。本文就MUC1在转化的可传代人胃黏膜上皮细胞系(GES-1)和低分化胃腺癌细胞系(BGC-823)中的表达及其意义进行探讨。
1 材料与方法
1.1 细胞培养和细胞株处理
SV40病毒转化的可传代人胃黏膜上皮细胞系(GES-1)由北京市肿瘤防治研究所提供；低分化胃腺癌细胞系(BGC-823)由哈医大肿瘤研究所提供。GES-1和BGC-823用含15%灭活胎牛血清和适量抗生素的RPMI Medium 1640培养液，在含5% CO2、37℃条件下培养。在24孔板中每孔均放置5 mm×5 mm的盖玻片一块，并加入对数期的GES-1、BGC-823细胞分别为(4×104)、(10×104)个，贴壁生长至占盖玻片面积的80%时，进行固定、染色。
1.2 试剂
羊抗人MUC1多克隆抗体购自SANTA CRUZ公司；FITC-兔抗山羊IgG购自北京中杉；RPMI Medium 1640购自GIBCO；FBS购自四季青公司。
1.3 间接免疫荧光染色法检测黏蛋白1在胃黏膜上皮细胞系和低分化胃腺癌细胞系中的表达
弃去24孔板中培养液，滴加pH 7.4的PBS冲洗标本，轻微震荡；4%多聚甲醛室温固定30 min；0.5% Triton X-100/PBS液抽提30 min；然后用PBS冲洗，取出玻片，滴加1∶200羊抗人MUC1多克隆抗体；将玻片置于湿盒内，4℃过夜；用PBS冲洗后取出玻片，滴加1∶100 FITC-兔抗山羊IgG抗体(在暗室中进行)；室温，将玻片平放在湿盒内2 h；然后荧光显微镜下观察拍照。
1.4 结果判定
设两组阴性对照：一组不加Ⅰ抗和Ⅱ抗，用于荧光强度的基线校正；一组仅加Ⅱ抗，用于非特异性结合对照。用荧光显微镜在蓝色激发光下观察结果：抗体结合处呈现绿色荧光，说明该处有MUC1的存在，判定为阳性表达细胞，如无绿色荧光呈现，判定为阴性表达细胞；重复试验，取平均值。
1.5 统计学方法
利用多功能成像分析系统(Motic软件开发公司)进行MUC1的平均光密度检测 ......
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