参七粉对动脉粥样硬化家兔血脂代谢及血管内皮功能的影响(2)
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1.1.2 动物和仪器 健康新西兰白兔40只，雌雄各半，体重2.0～2.5 kg，4个月龄，由广东药学院动物药理实验室提供。LD-R4-84C冷冻离心机(法国制造)，日立717OA型全自动生化分析仪，SN-682型放射免疫γ-计数器(上海核辐射光电仪器有限公司)，FT-646A微机单头放免仪(北京核仪器仪器厂)，奥林帕斯CH30光学显微镜。
1.2 实验方法
1.2.1 动物分组与造模 所有实验动物在实验前均以普通饲料适应性饲喂1周，排除饮食异常者，在稳定其血脂水平及代谢状况后，随机分为4组，即对照组、模型组、参七粉组和血脂康组，每组10只，除对照组给予普通饲料外，其余各组每天上午均先给予高脂饲料50 g/(kg·d)，待食完后晚上再补充普通颗粒饲料。同时，参七粉组给参七粉2.0 g/(kg·d)饲喂，血脂康组给血脂康0.5 g/(kg·d)饲喂 (均将药物拌入少量的高脂饲料内食入后，再投入剩余的高脂饲料)。动物单笼饲养，饮水不限，自由摄食，4组平行试验8周。
1.2.2 TC、TG、LDL-C、HDL-C的测定 各组试验动物分别于实验前及实验第8周末，禁食(不禁水)12 h，经耳缘静脉取血，分离血清，用酶法测定血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平，采用日立717OA型全自动生化分析仪检测。各组血脂的测定结果见表1。
1.2.3 TXB2、6-K-PGF1α、ET的测定 各组试验动物分别于实验第8周末，禁食(不禁水)12 h，经耳缘静脉取血2.5 mL，加2%EDTA抗凝，4℃，3 000 r/min离心10 min，取血浆-20℃保存待测。TXB2、6-K-PGF1α、ET均用放射免疫法测定，具体测定步骤按放免试剂盒说明书操作。各指标测定见表2。
1.2.4 病理标本的制作及主动脉内膜形态学观察 于实验第8周末采血完毕后将所有实验动物以气栓法处死。打开胸腔，立即将主动脉根部至髂动脉分叉处的整条动脉取出，剥离外膜结缔组织，纵向剖开，用生理盐水洗去血迹，进行大体形态观察。取升主动脉至主动脉弓部组织，用10%甲醛固定后石蜡包埋，制备横切面石蜡切片，厚度为4 μm，用苏木精-伊红(HE)染色，常规制作光镜标本，观察主动脉壁血管内皮细胞组织形态学的改变。
1.3 AS斑块判断标准[7]
肉眼观察为点状或条纹状黄色不隆起或微隆起于内膜的病灶，常见于主动脉后壁及其分支出口处。光镜下病灶处的内膜下有大量泡沫细胞聚集。泡沫细胞体积大，圆形或椭圆形，胞质内含有大量小空泡。
1.4 统计学方法
采用统计软件SPSS 15.0对实验数据进行分析，计量资料数据以均数±标准差(x±s)表示，采用方差分析，多组间两两比较采用LSD-t检验。以P < 0.05为差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 参七粉对血脂的影响
结果显示，实验前各组间动物的血脂水平差异无统计学意义。实验后第8周末，与对照组比较，模型组、参七粉组和血脂康组血清TC、TG、LDL-C明显高于对照组(P < 0.05或P < 0.01)；与模型组比较，参七粉组和血脂康组血清TC、TG、LDL-C明显低于模型组(P < 0.05)；HDL-C各组间差异无统计学意义(P > 0.05)。见表1。
表1 各组第8周末血脂的测定结果(x±s，mmol/L)
注：与对照组比较，﹟P < 0.05，##P < 0.01；与模型组比较，▲P < 0.05
2.2 参七粉对TXB2、6-K-PGF1α、ET的影响
实验前各组间TXB2、6-K-PGF1α、ET差异无统计学意义。实验后第8周末，模型组血浆ET、TXB2含量较对照组显著升高(P < 0.05或P < 0.01)，6-K-PGF1α/TXB2值较对照组显著降低(P < 0.01)；与模型组比较，参七粉组和血脂康组ET、TXB2含量明显低于模型组(P < 0.05)；6-K-PGF1α/ TXB2值则显著高于模型组(P < 0.05)；各组间6-K-PGF1α差异无统计学意义(P > 0.05)。见表2。
表2 各组第8周末ET、6-K-PGF1α、TXB2的测定结果(x±s)
注：与对照组比较，﹟P < 0.05，##P < 0.01；与模型组比较，▲P < 0.05
2.3 主动脉内膜组织形态学改变
肉眼观察：对照组主动脉血管壁薄而有弹性，内膜光滑，色泽正常，无脂质条纹形成；模型组主动脉病变最为严重，内膜表面粗糙，可见大量点状或条纹状黄色微隆起于内膜的脂质斑块，可见AS斑块形成，为灰白色，相互融合成片状，明显隆起突向管腔，表面粗糙不平，管腔明显狭窄；参七粉组和血脂康组表现为不同程度降低AS病变，斑块减小。光镜下观察对照组血管内膜平坦，结构完整，内皮细胞清晰，胞质中未见异常颗粒，肌纤维排列整齐，中膜平滑肌细胞排列规则整齐；模型组见粥样硬化斑块形成，血管内膜有大量泡沫细胞聚集，内皮细胞结构不完整，肌纤维排列紊乱并有断裂现象，局部内皮坏死脱落，表面可见有小火山喷口样缺损；参七粉组和血脂康组显示血管内膜层的泡沫细胞比模型组少，血管内皮细胞清晰，其间有少量胶原纤维分布，肌纤维排列整齐。见图1。
3 讨论
现已公认高脂血症是AS发生的重要因素之一，其中TC、LDL-C被视为致AS的危害因子。现已知血清TC、TG和LDL水平与AS形成呈正相关，HDL水平与AS形成呈负相关[8]。本实验结果表明，参七粉能使高脂血症家兔的TC、TG、LDL-C明显降低，光镜下观察可见：预防性服用参七粉能显著减轻高脂模型家兔主动脉血管的AS斑块，提示参七粉能调节血脂代谢，降低血脂水平，具有防治血脂紊乱和抗AS的作用。
近年来随着对血管内皮细胞生物功能认识的不断深入，普遍认为内皮细胞损伤所致的内皮功能障碍是AS形成的早期表现。已知血管内皮细胞分泌多种血管活性物质，参与动脉壁细胞生物功能的调节。其中，内皮素(ET)是一种重要的血管内皮损伤因子，是肽类血管收缩剂，具有强大的收缩血管和促进血管平滑肌的增殖作用，参与动脉粥样硬化斑块的形成[9]。血栓素(TXA2)是另一具有强烈刺激血管收缩和促使血小板聚集的活性物质，并能刺激血管细胞增殖，促进动脉粥样硬化形成。前列环素(PGI2)为强力的血管扩张物，具有对抗TXA2的作用，抑制血小板聚集，在心血管疾病中具有保护作用。TXA2与PGI2呈拮抗关系，两者维持着平衡状态，凡倾向于血栓形成的因素均与TXA2生成增多或PGI2减少有关，二者含量变化在AS形成发展中起到重要作用[7]。TXA2与PGI2极不稳定， 在血中的半衰期很短，不易直接测得，因此目前一般是通过测定两者的稳定代谢产物TXB2、6-K-PGF1α的含量来了解TXA2与PGI2的变化。本实验结果表明，参七粉能显著降低高脂模型家兔血浆ET、TXB2水平，提高6-酮-PGF1α/TXB2比值，对预防AS的发生及防止体内血栓形成起着重要作用 ......
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