参知健脑胶囊对记忆障碍小鼠模型行为学的影响(1)
[摘要] 目的 观察参知健脑胶囊对再现性、巩固性、获得性记忆障碍小鼠模型行为学的影响。 方法 均以跳台成绩为依据，将ICR小鼠随机为空白组、模型组、西药组、超大剂量组、大剂量组、中剂量组、小剂量组，每组18只。灌胃用药7 d后用30%乙醇、12.5 mg/mL亚硝酸钠、0.3 mg/mL东莨菪碱致再现性、巩固性、获得性记忆障碍小鼠模型造模，记录避暗被动躲避训练中各组动物的潜伏期、电击次数，并统计分析。 结果 在再现性记忆障碍模型中，与模型组比较，西药组(吡拉西坦)及大、中、小剂量组潜伏期、电击次数，差异均有高度统计学意义(P < 0.01)；在巩固性记忆障碍模型中，与模型组比较，西药组(安理申)及中剂量组的潜伏期，差异均有统计学意义(P < 0.05或P < 0.01)；在获得性记忆障碍模型中，与模型组比较，大、中、小剂量组的潜伏期，差异均有统计学意义(P < 0.05或P < 0.01)。 结论 在行为学方面，参知健脑胶囊中剂量对再现性及巩固性记忆障碍模型均有较稳定的改善学习记忆成绩的作用。
[关键词] 参知健脑胶囊；记忆障碍；行为学；小鼠模型
[中图分类号] R285.5[文献标识码] A[文章编号] 1673-7210(2012)03(a)-0032-03
随着脑血管病发病率的逐年增高，血管性痴呆的患病率也相应提高，目前北京地区血管性痴呆的患病率达1.5%[1]。目前血管性痴呆的治疗手段有限，西药作用靶点单一，疗效难以满足患者的需求。发挥中医药多靶点优势，优化组方配伍，开发有效治疗血管性痴呆的现代中药是摆在中医药工作者面前的一项重要课题。参知健脑胶囊由人参、知母、赤芍等药物提取物按一定比例优化配伍而成[2]，具有扶正、通络、解毒的功效，是以王永炎院士等[3-5]提出的“正虚毒损络阻”血管性痴呆创新病因病机理论为基础研发而来。本研究旨在观察参知健脑胶囊对记忆障碍小鼠模型行为学的影响，为本药物的临床应用提供可靠的药效研究数据。
1 仪器与试药
1.1 药物及仪器
参知健脑胶囊(粉装)，临床剂量为1.05 g/d，由北京中医药大学中药学院制备，批号：20100907；吡拉西坦片，天津金世制药有限公司，批号：20100715；多奈哌齐片，卫材(中国)药业有限公司，批号：091002A；95%乙醇，北京化工厂，批号：20030917；亚硝酸钠(分析纯)，北京化工厂，批号：100201；氢溴酸东莨菪碱注射液(0.3 mg/支)，徐州莱恩药业有限公司，批号：1010201；无菌生理盐水，北京双鹤药业股份有限公司，批号：A201010261。跳台仪及程控避暗箱(中国医学科学院药物研究所)。
1.2 实验动物
ICR小鼠雌雄各半，体重18～20 g，分为三批次(合格证号分别为：0199440、0194548、0202246)，每批数目为雌雄各55、75、75只，均由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。每日光照12 h，自由进食饮水。
2 方法与结果
2.1 动物模型制作及分组给药
2.1.1 再现性记忆障碍模型实验分组及给药对雌雄各55只小鼠进行跳台被动回避训练，根据学习成绩各筛选54只，随机将其分为6个组，分别为空白组、模型组、西药组(吡拉西坦)，参知健脑胶囊大剂量组、中剂量组、小剂量组(大、中、小三个剂量比例为9∶3∶1，其中，中剂量为人临床剂量的折算剂量)，每组18只。给药方式为灌胃，剂量为0.1 mL/10 g，空白组、模型组给予等体积生理盐水，西药组给予吡拉西坦，剂量为0.54 mg/kg。
2.1.2 再现性记忆障碍模型的制作及观察指标各组在测试前连续给药7 d，在末次给予生理盐水、吡拉西坦、参知健脑胶囊大、中、小剂量后2 h后进行避暗被动回避训练，训练时间为300 s。第8天，除空白组外，其他各组给药1 h后给予30%乙醇灌胃，雄鼠剂量为0.15 mL/10 g体重，雌鼠剂量为0.20 mL/10 g体重，空白组给予等体积生理盐水。30 min后进行避暗被动回避训练，记录潜伏期及遭受电击次数。
2.1.3 巩固性、获得性记忆障碍模型实验分组及给药对雌雄各75只小鼠进行跳台被动回避训练，根据学习成绩各筛选63只，随机将其分为7个组，分别为空白组、模型组、西药组(安理申)、参知健脑胶囊超大剂量组、大剂量组、中剂量组、小剂量组(超大、大、中、小三个剂量比例为18∶9∶3∶1，其中，中剂量为人临床剂量的折算剂量)，每组18只。给药方式为灌胃，剂量为0.1 mL/10 g，空白组、模型组给予等体积生理盐水，西药组给予安理申，剂量为0.65 mg/kg。
2.1.4 巩固性记忆障碍模型的制作及观察指标各组在测试前连续给药7 d，在末次给予生理盐水、安理申、参知健脑胶囊超大、大、中、小剂量后2 h后，除空白组外，其他各组给予皮下注射亚硝酸钠溶液，剂量为125 mg/kg，之后立即进行避暗被动回避训练，训练时间为300 s。第8天，重复避暗被动回避训练，记录潜伏期及遭受电击次数。
2.1.5 获得性记忆障碍模型的制作及观察指标各组在测试前连续给药7 d，在末次给予生理盐水、安理申、参知健脑胶囊超大、大、中、小剂量后2 h后，除空白组外，其他各组给予皮下注射氢溴酸东莨菪碱注射液，剂量为4.5 mg/kg，之后立即进行避暗被动回避训练，训练时间为300 s。第8天，重复避暗被动回避训练，记录潜伏期及遭受电击次数。
2.1.6 统计学方法采用SPSS 17.0统计软件，计量资料数据以均数±标准差(x±s)表示。由于各组数据不符合正态性，采用多个独立样本的Kruskal-Wallis H非参数检验法，采用秩变换技术予以秩转换后，采用单因素方差分析(One-Way ANOVA)的LSD-t检验法进行组间两两比较[7]。以P < 0.05为差异具有统计学意义。
2.2 结果
2.2.1 再现性记忆障碍模型行为学实验结果该实验中共有7只动物因灌胃死亡。结果显示，与模型组比较，西药组(吡拉西坦)及大、中、小剂量组潜伏期、电击次数增大，差异均有高度统计学意义(P < 0.01)；大、中、小剂量组与西药组比较，电击次数差异均有高度统计学意义(P < 0.01)。见表1。
2.2.2 巩固性记忆障碍模型行为学实验结果该实验中共有9只动物因灌胃死亡。结果显示，与模型组比较，西药组(安理申)及中剂量组的潜伏期增大，差异均有统计学意义(P < 0.05或P < 0.01)；小剂量组与西药组比较，潜伏期差异有统计学意义(P < 0.05)；其余各组间的潜伏期及电击次数差异均无统计学意义。见表2。
2.2.3 获得性记忆障碍模型行为学实验结果该实验中共有9只动物因灌胃死亡。结果显示，与模型组比较，大、中、小剂量组的潜伏期，差异均有统计学意义(P < 0.05或P < 0.01)；各剂量组潜伏期及电击次数与西药组比较，组间差异均无统计学意义。见表3。
3 讨论
人参、知母和赤芍是临床治疗VD的常用药物，三种成分均能改善痴呆动物模型学习记忆能力。人参为五加科草本植物人参的根，具有大补元气，补肺、脾、心、肾气，生津，安神益智的功效。研究发现，人参皂苷有提高拟痴呆模型动物学习记忆能力、改善脑内神经递质含量及作用、减少神经细胞凋亡、保护海马神经元和突触、增加血管新生、抗脑缺血、保护脑损伤等作用[8-16]，可以用来“扶正”。知母，苦、寒、无毒，为百合科植物知母的根茎，能清热降火，滋阴润燥。研究发现，知母皂苷元能改善痴呆动物的学习记忆能力，良性调节痴呆动物的胆碱能系统，清除自由基等[17-22]，可以用来“清热以祛毒”。赤芍，苦，微寒，归肝经，清热凉血，散瘀止痛。研究发现，芍药总苷能提高痴呆动物的学习记忆能力，对神经细胞缺氧、缺糖、氧自由基及一氧化氮神经毒性等损伤有显著保护作用[23-24]，可以用以“散瘀凉血，以通脑络”。因此，全方具有“扶正、祛毒、通络”的作用，以治疗VD，而其组分又均具有改善脑内神经递质含量及作用、保护神经元和突触、抗脑缺血、清除自由基等，从而提高学习记忆能力，改善痴呆的作用。, http://www.100md.com(马大勇 韩振蕴 范吉平 章正祥)
[关键词] 参知健脑胶囊；记忆障碍；行为学；小鼠模型
[中图分类号] R285.5[文献标识码] A[文章编号] 1673-7210(2012)03(a)-0032-03
随着脑血管病发病率的逐年增高，血管性痴呆的患病率也相应提高，目前北京地区血管性痴呆的患病率达1.5%[1]。目前血管性痴呆的治疗手段有限，西药作用靶点单一，疗效难以满足患者的需求。发挥中医药多靶点优势，优化组方配伍，开发有效治疗血管性痴呆的现代中药是摆在中医药工作者面前的一项重要课题。参知健脑胶囊由人参、知母、赤芍等药物提取物按一定比例优化配伍而成[2]，具有扶正、通络、解毒的功效，是以王永炎院士等[3-5]提出的“正虚毒损络阻”血管性痴呆创新病因病机理论为基础研发而来。本研究旨在观察参知健脑胶囊对记忆障碍小鼠模型行为学的影响，为本药物的临床应用提供可靠的药效研究数据。
1 仪器与试药
1.1 药物及仪器
参知健脑胶囊(粉装)，临床剂量为1.05 g/d，由北京中医药大学中药学院制备，批号：20100907；吡拉西坦片，天津金世制药有限公司，批号：20100715；多奈哌齐片，卫材(中国)药业有限公司，批号：091002A；95%乙醇，北京化工厂，批号：20030917；亚硝酸钠(分析纯)，北京化工厂，批号：100201；氢溴酸东莨菪碱注射液(0.3 mg/支)，徐州莱恩药业有限公司，批号：1010201；无菌生理盐水，北京双鹤药业股份有限公司，批号：A201010261。跳台仪及程控避暗箱(中国医学科学院药物研究所)。
1.2 实验动物
ICR小鼠雌雄各半，体重18～20 g，分为三批次(合格证号分别为：0199440、0194548、0202246)，每批数目为雌雄各55、75、75只，均由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。每日光照12 h，自由进食饮水。
2 方法与结果
2.1 动物模型制作及分组给药
2.1.1 再现性记忆障碍模型实验分组及给药对雌雄各55只小鼠进行跳台被动回避训练，根据学习成绩各筛选54只，随机将其分为6个组，分别为空白组、模型组、西药组(吡拉西坦)，参知健脑胶囊大剂量组、中剂量组、小剂量组(大、中、小三个剂量比例为9∶3∶1，其中，中剂量为人临床剂量的折算剂量)，每组18只。给药方式为灌胃，剂量为0.1 mL/10 g，空白组、模型组给予等体积生理盐水，西药组给予吡拉西坦，剂量为0.54 mg/kg。
2.1.2 再现性记忆障碍模型的制作及观察指标各组在测试前连续给药7 d，在末次给予生理盐水、吡拉西坦、参知健脑胶囊大、中、小剂量后2 h后进行避暗被动回避训练，训练时间为300 s。第8天，除空白组外，其他各组给药1 h后给予30%乙醇灌胃，雄鼠剂量为0.15 mL/10 g体重，雌鼠剂量为0.20 mL/10 g体重，空白组给予等体积生理盐水。30 min后进行避暗被动回避训练，记录潜伏期及遭受电击次数。
2.1.3 巩固性、获得性记忆障碍模型实验分组及给药对雌雄各75只小鼠进行跳台被动回避训练，根据学习成绩各筛选63只，随机将其分为7个组，分别为空白组、模型组、西药组(安理申)、参知健脑胶囊超大剂量组、大剂量组、中剂量组、小剂量组(超大、大、中、小三个剂量比例为18∶9∶3∶1，其中，中剂量为人临床剂量的折算剂量)，每组18只。给药方式为灌胃，剂量为0.1 mL/10 g，空白组、模型组给予等体积生理盐水，西药组给予安理申，剂量为0.65 mg/kg。
2.1.4 巩固性记忆障碍模型的制作及观察指标各组在测试前连续给药7 d，在末次给予生理盐水、安理申、参知健脑胶囊超大、大、中、小剂量后2 h后，除空白组外，其他各组给予皮下注射亚硝酸钠溶液，剂量为125 mg/kg，之后立即进行避暗被动回避训练，训练时间为300 s。第8天，重复避暗被动回避训练，记录潜伏期及遭受电击次数。
2.1.5 获得性记忆障碍模型的制作及观察指标各组在测试前连续给药7 d，在末次给予生理盐水、安理申、参知健脑胶囊超大、大、中、小剂量后2 h后，除空白组外，其他各组给予皮下注射氢溴酸东莨菪碱注射液，剂量为4.5 mg/kg，之后立即进行避暗被动回避训练，训练时间为300 s。第8天，重复避暗被动回避训练，记录潜伏期及遭受电击次数。
2.1.6 统计学方法采用SPSS 17.0统计软件，计量资料数据以均数±标准差(x±s)表示。由于各组数据不符合正态性，采用多个独立样本的Kruskal-Wallis H非参数检验法，采用秩变换技术予以秩转换后，采用单因素方差分析(One-Way ANOVA)的LSD-t检验法进行组间两两比较[7]。以P < 0.05为差异具有统计学意义。
2.2 结果
2.2.1 再现性记忆障碍模型行为学实验结果该实验中共有7只动物因灌胃死亡。结果显示，与模型组比较，西药组(吡拉西坦)及大、中、小剂量组潜伏期、电击次数增大，差异均有高度统计学意义(P < 0.01)；大、中、小剂量组与西药组比较，电击次数差异均有高度统计学意义(P < 0.01)。见表1。
2.2.2 巩固性记忆障碍模型行为学实验结果该实验中共有9只动物因灌胃死亡。结果显示，与模型组比较，西药组(安理申)及中剂量组的潜伏期增大，差异均有统计学意义(P < 0.05或P < 0.01)；小剂量组与西药组比较，潜伏期差异有统计学意义(P < 0.05)；其余各组间的潜伏期及电击次数差异均无统计学意义。见表2。
2.2.3 获得性记忆障碍模型行为学实验结果该实验中共有9只动物因灌胃死亡。结果显示，与模型组比较，大、中、小剂量组的潜伏期，差异均有统计学意义(P < 0.05或P < 0.01)；各剂量组潜伏期及电击次数与西药组比较，组间差异均无统计学意义。见表3。
3 讨论
人参、知母和赤芍是临床治疗VD的常用药物，三种成分均能改善痴呆动物模型学习记忆能力。人参为五加科草本植物人参的根，具有大补元气，补肺、脾、心、肾气，生津，安神益智的功效。研究发现，人参皂苷有提高拟痴呆模型动物学习记忆能力、改善脑内神经递质含量及作用、减少神经细胞凋亡、保护海马神经元和突触、增加血管新生、抗脑缺血、保护脑损伤等作用[8-16]，可以用来“扶正”。知母，苦、寒、无毒，为百合科植物知母的根茎，能清热降火，滋阴润燥。研究发现，知母皂苷元能改善痴呆动物的学习记忆能力，良性调节痴呆动物的胆碱能系统，清除自由基等[17-22]，可以用来“清热以祛毒”。赤芍，苦，微寒，归肝经，清热凉血，散瘀止痛。研究发现，芍药总苷能提高痴呆动物的学习记忆能力，对神经细胞缺氧、缺糖、氧自由基及一氧化氮神经毒性等损伤有显著保护作用[23-24]，可以用以“散瘀凉血，以通脑络”。因此，全方具有“扶正、祛毒、通络”的作用，以治疗VD，而其组分又均具有改善脑内神经递质含量及作用、保护神经元和突触、抗脑缺血、清除自由基等，从而提高学习记忆能力，改善痴呆的作用。, http://www.100md.com(马大勇 韩振蕴 范吉平 章正祥)