抑癌基因TIP30表达对大肠癌发生、发展的影响(2)
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参见附件。
1.2 实验方法
1.2.1 免疫组化 采用北京中杉生物技术公司免疫组化S-P试剂盒，生物素标记DAB显色试剂盒，Imgenex公司的鼠抗人TIP30抗体，Dako公司的酶标抗小鼠TIP30抗体等进行标准的免疫组化流程实验。
1.2.2 对照设计 用已知阳性切片做阳性对照，结果阳性。以0.01 mol/L的PBS代替一抗做阴性对照，结果阴性。
1.3 免疫组化结果判定
TIP30蛋白主要表达于细胞质，阳性染色细胞部分呈棕褐色颗粒或团块。用显微镜观察并计数，每张切片选择10个高倍视野，取其均数。免疫组化结果评分方法如下：按照阳性染色细胞数的百分比评分，阳性细胞数>50%计3分，25% 0.05)；而不同血清CEA水平、淋巴结转移情况及临床分期组患者间TIP30蛋白表达阳性率差异具有统计学差异(P < 0.05)。见表1。
表1 TIP30蛋白在大肠癌中表达与患者临床病理特征的关系(例)
3 讨论
目前在全世界最常见的恶性肿瘤中，大肠癌的发病率位居第3~4位，虽然在其诊断及治疗方面取得了一定进展，但是对晚期患者的预后并没有明显的改善。因此，迫切需要全面认识大肠癌的发病原因、致病机理及复发转移机制。近年来研究发现，大肠癌同其他恶性肿瘤类似，是一种非常复杂的基因病，其整个发生发展过程伴随着多种基因的表达紊乱，既包括癌基因的活化与过表达，又包括抑癌基因的表达降低、表达沉默等[4]。
大肠癌的早期诊断和治疗对预后至关重要。据统计，如能早期发现并及时治疗，其5年生存率可达90%。提高大肠癌的远期生存率，关键是提高其早期诊断率。但是，尽管现代医学不断发展，在大肠癌早期诊断方面仍然缺乏行之有效的手段，约30%的患者在出现便血等明显症状并就诊时，已达局部晚期或发生远处转移[5-6]。因此，寻找一种简便且敏感性和特异性均较高的大肠癌诊断指标已成为医学工作者面临的一大难题。另一方面，大肠癌的预后评估在选择治疗方法时发挥关键作用。即使在根治术后，大肠癌的高复发转移特性导致超过1/5患者出现复发转移，生存率大大降低[7]。在临床中，TNM分期及Dukes分期依旧是医学工作者评估预后的常用依据，但是二者在评价预后时均存在局限性，即使同一分期的患者，其生存率有时存在巨大差异。近年来，分子生物学的迅猛发展，为明确大肠癌发生、发展机制，辅助诊断及评估预后提供了新思路。
TIP30基因定位于人类第11号染色体，小鼠的第7号染色体。人类TIp30 基因的cDNA 序列表明它有一个编码含242 个氨基酸残基的多肽开放阅读框，5'端始第99位有第1个甲硫氨酸密码子。序列对比分析显示，人类TIP30与线虫等的氨基酸序列具有高度的同源性，提示其在进化上高度保守，其产物蛋白作为短链脱氢酶以及还原酶超家族成员之一，通过NADPH相结合感受细胞内的氧化还原状态，在细胞生命活动中发挥重要作用[8]。
相关研究显示，TIP30的RNA转录产物在心、脑、肺、肾、骨骼肌和胰腺等正常组织中广泛存在，并在某些肿瘤细胞系(如结肠癌、神经上皮瘤、黑色素瘤)中降低或缺失[9]。TIP30可通过调节细胞凋亡相关基因和转移相关基因的表达，抑制肿瘤生长和转移[10-11]。张霞等[3]在研究中发现，与癌旁组织相比，TIP30蛋白在大肠癌组织中表达明显降低，且与大肠癌临床分期、浸润程度、分化程度、淋巴结转移相关。此外，肠癌组织中P53蛋白表达及VEGF的转录水平也和TIP30蛋白的表达相关。提示TIP30基因的表达缺陷可能通过下调P53的表达减弱其抑癌作用导致肿瘤的发生发展。
本文结果表明，TIP30在多数大肠癌组织中表达缺失，且与大肠癌患者的临床指标(如临床分期、CEA水平、淋巴结是否转移等)密切相关，提示TIP30在大肠癌中具有肿瘤抑制基因的功能。此外，可以在基因学层面进一步探讨TIP30启动子甲基化状态与TIP30蛋白表达以及患者临床病理特征之间的关系，旨在明确大肠癌组织中是否存在TIP30基因高甲基化状态，分析基因甲基化在大肠癌TIP30基因表达调控中的作用，探讨TIP30基因表达调控的表观遗传学机制，探索TIP30启动子甲基化能否作为大肠癌新的肿瘤标记物。
[参考文献]
[1] Melissa M，Ahmedin J，Robert A，et al. Worldwide Variations in Colorectal Cancer [J]. CA Cancer J Clin ......
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