大孔吸附树脂纯化黄芩总黄酮工艺研究(3)
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取浓度为80 mg/mL的样品，通过大孔树脂色谱柱(树脂体积50 mL，径高比1∶8)，以1 BV/h的流速进行动态吸附。用盐酸-镁粉反应，并辅以TLC薄层检测流出液的黄酮类化合物，待反应呈阳性时，停止上样，记录上样量，用4倍柱体积水洗，水洗流速为1 BV/h，收集水洗液定容于1 000 mL量瓶中，测定溶液中总黄酮的含量。再用80%乙醇洗脱，醇洗体积为8 BV，收集洗脱液于1 000 mL量瓶中，定容，测定溶液中总黄酮的含量。
树脂使用一次后，用95%乙醇处理，重复使用，并依次进行试验，共使用11次，测定每次总黄酮的吸附量，当总黄酮吸附量降低到最大吸附量的70%时，停止使用。第10次总黄酮的吸附量为最大吸附量的61%，第9次总黄酮的吸附量为最大吸附量的75%，可见树脂最多使用次数为9次，耐用性比较好。如果再用酸碱处理后，可能还能重复使用多次。
2.10 验证工艺考察
按上述所确定的吸附和洗脱条件，即：上样液浓度为80 mg药材/mL，径高比为1∶8，吸附流速为1 BV/h，除杂溶剂为水，除杂体积为4 BV，除杂流速为1 BV/h，洗脱溶剂为50%乙醇，洗脱体积为8 BV，洗脱流速为1 BV/h。平行制备三批样品，依照上法测定出膏率分别为17.41%、18.97%、18.31%，平均值为18.23%；黄酮的含量分别为89.26%、87.74%、88.45%，平均值为88.48%。因此，此工艺可用于生产黄芩总黄酮，而且树脂可以再生，成本较低，无污染，生产周期短，适合大规模生产。
3 讨论
文献[3-4]报道采用70%乙醇为溶剂进行渗漉提取，浓缩后，用乙酸乙酯萃取分离出苷元，将水层部分用大孔吸附树脂进行纯化。该工艺采用渗漉提取法，时间较长，溶剂耗费量大，采用乙酸乙酯萃取，增加了工艺流程，对环境和人体不够友好。文献[5]报道采用D241树脂分离纯化黄芩总黄酮，但是D241树脂属于离子交换树脂，实际操作涉及离子交换树脂的再生和提取溶液酸碱性的调整，纯化工艺步骤较多，比较繁琐。这些工艺均不适宜于工业化生产。大孔吸附树脂柱径高比的考察是与实际生产场地、设备安装有关的因素，而文献[6]中没有考察这些。文献[7]中采用正交试验设计法考察样品溶液的浓度、上样液pH值、上样流速这3个条件对大孔树脂吸附黄芩苷的影响，实际上这3个因素互相影响并不大，正交试验设计法并不太适用于大孔吸附树脂纯化化合物的工艺研究。
作者在综合多篇文献的基础上，进行了本文的实验。确定大孔吸附树脂纯化黄芩总黄酮的工艺即：选择AB-8大孔吸附树脂，上样药液浓度为80 mg药材/mL，径高比为1∶8，吸附流速为1 BV/h，除杂溶剂为水，除杂体积为4 BV，除杂流速为1 BV/h，洗脱溶剂为50%乙醇，洗脱体积为8 BV，洗脱流速为1 BV/h。该工艺合理、可行，适合工业生产。
[参考文献]
[1] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010， 282-283.
[2] 杨娟，傅军鹏.黄芩活性成分及药效研究近况[J].实用医药杂志，2004， 21(3)：271-273.
[3] 刘昌，魏元锋，刘新国，等.利用大孔吸附树脂对黄芩总黄酮的纯化研究[J].云南中医学院学报，2007，30(3)：40-47.
[4] 魏元锋，刘新国，韩建伟，等.HP20树脂纯化黄芩总黄酮的研究[J].湖北中医杂志 ......
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