1.5.5 检测基因表达 Western blot 分析：具体步骤详见《分子克隆》[7]，操作步骤如下：取预冷的玻璃组织研磨器加入所需瘤体组织和组织裂解液500 μL[含苯*****(PMSF)(2±1)μL]，充分研磨裂解半小时，转入离心管中，反复振荡，剧烈涡旋15 s，静置10 min，4℃下12 000 r/min，离心20 min，收集上清至离心管中静置10 min(全部冰上操作)，离心取上清，进行蛋白质浓度测定(BCA法)。取蛋白40 μg利用Tris甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate - polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE)，12%分离胶和6%浓缩胶，后电转至PVDF膜。5%脱脂奶粉封闭后，加入一抗[血管内皮细胞生长因子(VEGF)、P53、P21、凋亡抑制基因(Bcl-2)；1∶1 000]4℃过夜，缓冲液吐温(tris buffered saline tween，TBST)洗膜后，加入HRP标记的二抗，室温孵育2 h，TBST洗膜后，增强化学发光法(enhanced chemiluminescence ......