四逆散有效组分改善睡眠作用与5-羟色胺能神经系统相关性的实验研究(1)
[摘要] 目的 探讨四逆散有效组分改善睡眠作用与5-羟色胺(5-HT)能神经系统的相关性。 方法 分别观察四逆散有效组分与5-HT前体物质5-羟色氨酸(5-HTP)、5-HT合成酶抑制剂对氯苯丙氨酸(PCPA)联用，对戊巴比妥钠所致小鼠睡眠时间的影响；运用酶联免疫吸附(ELISA)法测定不同脑区5-HT的含量及其代谢产物5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)的含量。 结果 阈下剂量四逆散有效组分联合5-HTP可协同延长戊巴比妥钠所致的小鼠睡眠时间(P < 0.05)；阈剂量四逆散有效组分对PCPA化小鼠睡眠时间缩短有对抗作用，PCPA亦可对抗四逆散有效组分的催眠作用；四逆散有效组分组小鼠前额叶皮质脑区5-HT的浓度明显升高(P < 0.05)，5-HIAA浓度显著降低(P < 0.05)。 结论 四逆散有效组分改善睡眠作用主要依赖于5-HT的存在，且延长戊巴比妥钠所致小鼠睡眠时间与5-HTP、PCPA、5-HIAA有关。
[关键词] 四逆散有效组分；睡眠；5-HT能神经系统；5-HTP；PCPA；5-HIAA
, http://www.100md.com
[中图分类号] R749.7 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2012)05(b)-0029-03
四逆散出自于《伤寒论》少阴病篇，为仲景名方。组方柴胡、枳实、芍药、甘草四味，临床应用广泛[1]。近年来有学者针对四逆散做了许多临床和药理学研究工作，根据本实验室近期的研究来看，四逆散有非常明确的改善睡眠的作用[2]。为进一步阐明基于5-HT能神经系统的四逆散有效组分改善睡眠的作用机制，笔者现通过四逆散有效组分对脑内5-HT能神经系统的多种物质含量的影响，表明其相关性。
1 仪器与试药
1.1 实验动物
KM种小鼠，清洁级，雄性，体重(23±2)g，由黑龙江中医药大学GLP实验室提供。
1.2 实验药物
, 百拇医药
四逆散有效组分的组成成分：辛弗林、芍药苷、柴胡皂苷C、甘草次酸(均由成都思科华生物技术有限公司提供)，四者比例关系为8∶1∶1∶5，临用前用含2%吐温-80的生理盐水配制成66.00 mg/mL浓度溶液，现用现配。
1.3 主要实验试剂
5-羟色氨酸：(Aladdin，批号：30817)；对氯苯丙氨酸：(Sigma，批号：C6506)。
2 方法与结果
2.1 方法
2.1.1 阈下剂量5-HTP联合阈下剂量四逆散有效组分对戊巴比妥钠所致小鼠睡眠的影响 取KM种小鼠60只，随机分成4组，分别为空白组、四逆散有效组分组、5-HTP组以及四逆散有效组分+5-HTP组(即为联合组)，每组15只，连续给药4 d，给药途径均为腹腔注射。四逆散有效组分组和联合组分别给予四逆散混合有效组分溶液(16.50 mg/mL，165.00 mg/kg，腹腔注射)；空白组和5-HTP组给予等体积生理盐水，5-HTP组和联合组均在注射戊巴比妥钠前15 min给予5-HTP(2.5 mg/mL，25 mg/kg，腹腔注射)，各组末次给药30 min后，腹腔注射戊巴比妥钠50 mg/kg，分别记录各组小鼠入睡的潜伏期及睡眠持续时间。
, 百拇医药
2.1.2 四逆散有效组分联合PCPA对戊巴比妥钠所致小鼠睡眠的影响 取KM种小鼠60只，随机分成4组，分别为空白组、四逆散有效组分组、PCPA组以及四逆散有效组分+PCPA组(即为联合组)，每组15只，连续给药4 d，给药途径均为腹腔注射。四逆散有效组分组和联合组分别给予四逆散混合有效组分溶液(66.00 mg/mL，660.00 mg/kg，腹腔注射)；空白组和PCPA组给予等体积生理盐水，PCPA组和联合组均在注射戊巴比妥钠前24 h行皮下注射PCPA(30 mg/mL，300 mg/kg，皮下注射)，所有各组末次给药30 min后，腹腔注射戊巴比妥钠50 mg/kg，分别记录各组小鼠入睡的潜伏期及睡眠持续时间。
2.1.3 四逆散有效组分对小鼠前额叶皮质、海马和下丘脑等不同脑区5-HT和5-HIAA含量的影响 取KM种小鼠30只，随机分成2组，即空白组和四逆散有效组分组，每组15只，四逆散有效组分组分别给予四逆散混合有效组分(66.00 mg/mL，660.00 mg/kg，腹腔注射)，空白组注射等体积生理盐水，连续给药4 d，末次给药后30 min，断头取脑，低温分离前额叶皮质、海马和下丘脑，分析天平称重，加入9倍生理盐水匀浆，3 500 r/min离心10 min，取上清液，酶联免疫吸附(Elisa)法测定其中5-HT和5-HIAA的浓度。
, 百拇医药
2.2 统计学方法
实验数据采用SPSS 13.0软件包处理，计量资料数据以均数±标准差(x±s)表示，采用单因素方差分析(Oneway-ANOVA)，两两比较采用LSD-t检验。以P < 0.05为差异有统计学意义。
2.3 结果
2.3.1 阈下剂量四逆散有效组分联合5-HTP对戊巴比妥钠所致小鼠睡眠的影响 阈下剂量四逆散有效组分联合5-HTP对戊巴比妥钠所致小鼠睡眠的影响结果表明，与空白组比较，四逆散有效组分组以及5-HTP 组小鼠无论从睡眠潜伏期均有缩短的趋势，但差异无统计学意义(P > 0.05)；在睡眠持续时间上均有延长的趋势，但统计学上无显著变化(P > 0.05)。但是，当阈下剂量四逆散和5-HTP联合应用时，与空白组比较，小鼠的睡眠潜伏期明显缩短(P < 0.05)，睡眠持续时间显著延长(P < 0.05)。
2.3.2 四逆散有效组分联合PCPA对戊巴比妥钠所致小鼠睡眠的影响 睡眠潜伏期的实验结果表明，与空白组比较，四逆散有效组分组小鼠睡眠的潜伏期明显缩短(P < 0.05)。睡眠持续时间的实验结果表明，与空白组比较，四逆散有效组分组可以显著延长小鼠睡眠时间(P < 0.05)，而PCPA组的睡眠持续时间明显缩短(P < 0.05)。另联合组与空白组比较差异无统计学意义(P > 0.05)。, 百拇医药(张乔 金阳 徐瑞鑫 李廷利)
[关键词] 四逆散有效组分；睡眠；5-HT能神经系统；5-HTP；PCPA；5-HIAA
, http://www.100md.com
[中图分类号] R749.7 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2012)05(b)-0029-03
四逆散出自于《伤寒论》少阴病篇，为仲景名方。组方柴胡、枳实、芍药、甘草四味，临床应用广泛[1]。近年来有学者针对四逆散做了许多临床和药理学研究工作，根据本实验室近期的研究来看，四逆散有非常明确的改善睡眠的作用[2]。为进一步阐明基于5-HT能神经系统的四逆散有效组分改善睡眠的作用机制，笔者现通过四逆散有效组分对脑内5-HT能神经系统的多种物质含量的影响，表明其相关性。
1 仪器与试药
1.1 实验动物
KM种小鼠，清洁级，雄性，体重(23±2)g，由黑龙江中医药大学GLP实验室提供。
1.2 实验药物
, 百拇医药
四逆散有效组分的组成成分：辛弗林、芍药苷、柴胡皂苷C、甘草次酸(均由成都思科华生物技术有限公司提供)，四者比例关系为8∶1∶1∶5，临用前用含2%吐温-80的生理盐水配制成66.00 mg/mL浓度溶液，现用现配。
1.3 主要实验试剂
5-羟色氨酸：(Aladdin，批号：30817)；对氯苯丙氨酸：(Sigma，批号：C6506)。
2 方法与结果
2.1 方法
2.1.1 阈下剂量5-HTP联合阈下剂量四逆散有效组分对戊巴比妥钠所致小鼠睡眠的影响 取KM种小鼠60只，随机分成4组，分别为空白组、四逆散有效组分组、5-HTP组以及四逆散有效组分+5-HTP组(即为联合组)，每组15只，连续给药4 d，给药途径均为腹腔注射。四逆散有效组分组和联合组分别给予四逆散混合有效组分溶液(16.50 mg/mL，165.00 mg/kg，腹腔注射)；空白组和5-HTP组给予等体积生理盐水，5-HTP组和联合组均在注射戊巴比妥钠前15 min给予5-HTP(2.5 mg/mL，25 mg/kg，腹腔注射)，各组末次给药30 min后，腹腔注射戊巴比妥钠50 mg/kg，分别记录各组小鼠入睡的潜伏期及睡眠持续时间。
, 百拇医药
2.1.2 四逆散有效组分联合PCPA对戊巴比妥钠所致小鼠睡眠的影响 取KM种小鼠60只，随机分成4组，分别为空白组、四逆散有效组分组、PCPA组以及四逆散有效组分+PCPA组(即为联合组)，每组15只，连续给药4 d，给药途径均为腹腔注射。四逆散有效组分组和联合组分别给予四逆散混合有效组分溶液(66.00 mg/mL，660.00 mg/kg，腹腔注射)；空白组和PCPA组给予等体积生理盐水，PCPA组和联合组均在注射戊巴比妥钠前24 h行皮下注射PCPA(30 mg/mL，300 mg/kg，皮下注射)，所有各组末次给药30 min后，腹腔注射戊巴比妥钠50 mg/kg，分别记录各组小鼠入睡的潜伏期及睡眠持续时间。
2.1.3 四逆散有效组分对小鼠前额叶皮质、海马和下丘脑等不同脑区5-HT和5-HIAA含量的影响 取KM种小鼠30只，随机分成2组，即空白组和四逆散有效组分组，每组15只，四逆散有效组分组分别给予四逆散混合有效组分(66.00 mg/mL，660.00 mg/kg，腹腔注射)，空白组注射等体积生理盐水，连续给药4 d，末次给药后30 min，断头取脑，低温分离前额叶皮质、海马和下丘脑，分析天平称重，加入9倍生理盐水匀浆，3 500 r/min离心10 min，取上清液，酶联免疫吸附(Elisa)法测定其中5-HT和5-HIAA的浓度。
, 百拇医药
2.2 统计学方法
实验数据采用SPSS 13.0软件包处理，计量资料数据以均数±标准差(x±s)表示，采用单因素方差分析(Oneway-ANOVA)，两两比较采用LSD-t检验。以P < 0.05为差异有统计学意义。
2.3 结果
2.3.1 阈下剂量四逆散有效组分联合5-HTP对戊巴比妥钠所致小鼠睡眠的影响 阈下剂量四逆散有效组分联合5-HTP对戊巴比妥钠所致小鼠睡眠的影响结果表明，与空白组比较，四逆散有效组分组以及5-HTP 组小鼠无论从睡眠潜伏期均有缩短的趋势，但差异无统计学意义(P > 0.05)；在睡眠持续时间上均有延长的趋势，但统计学上无显著变化(P > 0.05)。但是，当阈下剂量四逆散和5-HTP联合应用时，与空白组比较，小鼠的睡眠潜伏期明显缩短(P < 0.05)，睡眠持续时间显著延长(P < 0.05)。
2.3.2 四逆散有效组分联合PCPA对戊巴比妥钠所致小鼠睡眠的影响 睡眠潜伏期的实验结果表明，与空白组比较，四逆散有效组分组小鼠睡眠的潜伏期明显缩短(P < 0.05)。睡眠持续时间的实验结果表明，与空白组比较，四逆散有效组分组可以显著延长小鼠睡眠时间(P < 0.05)，而PCPA组的睡眠持续时间明显缩短(P < 0.05)。另联合组与空白组比较差异无统计学意义(P > 0.05)。, 百拇医药(张乔 金阳 徐瑞鑫 李廷利)