TCAB1慢病毒表达载体的构建及其在人子宫内膜间质细胞中的表达(2)
1.2 TCAB1(WRAP53)全长基因TA克隆1.2.1 引物设计 根据Genebank中报道的基因序列，应用软件设计TCAB1全长基因扩增引物(Invitrogen公司)：primer-F：CGGAATTCCGGCCATGAAGA CTTTGGAGACTCAAC；primer-R：ATTTGCGGCCGCACC TTATATCAGCTCA CC ACACCT；上下游引物分别含有EcoRI和NotI酶切位点；PCR终产物大小为1 675 bp。
1.2.2 RT-PCR TRIzol法抽提人子宫内膜间质细胞总RNA，Nanodrop检测RNA浓度，1%变性琼脂糖凝胶电泳检测RNA完整性，如见清晰的18 S和28 S两条带，说明总RNA完整性较好。取1 μg总RNA进行逆转录反应，PCR循环参数为：5℃冷却10 mim、50℃孵育50 min、85℃ 5 min终止反应。
1.2.3 目的基因片段扩增PCR 以巢式PCR技术将目的基因片段扩增，第一次PCR循环参数：95℃预变性5 min、94℃变性30 s、60℃退火30 s、72℃延伸90 s、72℃延伸10 min ......
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