参照Feeney法[3]建立大鼠闭合性脑挫伤，大鼠称重后，10%水合氯醛(0.3 mL/100 g)腹腔麻醉，常规消毒铺巾，褪毛，正中线切开头部皮肤，分离骨膜，在人字缝前方3 mm，颅骨中线左侧3 mm处，钻直径5 mm的圆形骨窗，保持硬脑膜完整，用自制的硬性打击垫放入骨窗，以50 g砝码在40 cm处落下打击一次；对照组仅切开头皮，钻孔等，不受自由落体物打击，然后直接处死取出脑组织，实验组大鼠分别在伤后1 h、6 h、24 h、48 h、72 h、7 d处死，于挫伤部位取出脑组织，然后分别称取100 g脑组织，放在液氮里密封存。

    1.4 方法

    本实验采用Western blot方法对大鼠脑挫伤后不同时间段ICAM-1的表达进行检测，从液氮中取出称重好的组织，加入蛋白裂解液，匀浆机中充分快速匀浆，在4℃提取蛋白后备用，加1︰2的样品缓冲液混匀，沸水浴5 min，取出样品混合液，对照组用加样缓冲液代替蛋白质样品，加在8%的聚丙烯酰胺凝胶中进行电泳分离蛋白质，然后用半干式电转移法将聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白质转移到硝酸纤维素膜上，用封闭液浸泡，4℃过夜，取出滴加一抗，4℃过夜，用TBST溶液冲洗5 min×4次，滴加生物素标记的羊抗兔抗体 ......