家兔胆汁的光谱特性及降压效应观察(2)
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参见附件。
[Key words] Rabbit bile; Ultravioletspectrum; Infrared spectrum; Antihypertensive
动物胆汁是我国的传统用药，其药用价值一直受到关注，临床上有来源熊胆、蛇胆、鸡胆、牛胆和猪胆等的制剂，具有消炎、止咳、解痉和降压等方面的功效。家兔的饲养在中国逐渐走向产业化，但其胆汁目前大多被当作废料丢弃。家兔胆汁有独特的理化特性和药理作用，具有开发为临床用药的前景。家兔胆汁含去氧胆酸最多，去氧胆酸有消炎、镇痉、降压、降血脂等方面的功效。本实验观察了家兔胆汁的紫外、红外光谱，作为鉴别家兔胆汁的可靠指标，同时还观察了其降压效应，为将其开发为降压药做前期研究。
1 材料与方法
1.1 实验材料
3月龄SD大鼠(广东医学院实验动物中心提供，许可证号：2009029)， Med Lab生物信号采集系统(南京美易公司)，岛津紫外光谱仪(UV-3101PC，日本)，红外光谱-红外显微镜联用系统(FTS175C-UMA500，美国BIO-RAD)。
1.2 实验试剂
家兔胆汁(广东医学院实验用兔采集)，青霉素钠(悦康药业集团有限公司，批号：090219)。
1.3 实验方法
1.3.1 胆汁紫外光谱测定 家兔新鲜胆汁蒸馏水稀释200倍后紫外光谱扫描，扫描波长范围是200～600 nm。
1.3.2 胆汁红外光谱测定 将新鲜家兔胆汁置于培养皿中，于60℃水浴箱中加热烘干后，密闭保存，取少许干燥胆汁与溴化银一起压片，在红外光谱仪中进行红外光谱扫描。
1.3.3 降压作用观察 21只3月龄Sprague-Dawley大鼠，体重范围250～300 g，随机分成三组：假手术组、模型组和胆汁组，每组各7只。模型组和胆汁组大鼠通过结扎左肾动脉建立高血压模型，具体方法是：大鼠在全麻下做腹部正中切口，找到并暴露左肾，小心分离肾动脉和肾静脉，然后平行肾动脉放置一去尖5号针头，一并结扎动脉和针头，抽出针头，逐层关腹，关腹后腹腔注射20万单位青霉素防止感染[1]。假手术组大鼠在分离肾动脉后，不做动脉结扎，直接关腹。术后1个月大鼠基本康复，开始给药。模型组、假手术组用生理盐水灌胃，胆汁组用新鲜的家兔胆汁灌胃，用量为0.3 mL/100 g。1个月后，全麻下进行颈总动脉插管，插管与Med Lab生物信号采集系统连接，测定大鼠血压，连续测定5 min。
1.4 统计学处理
采用SPSS 15.0统计学软件进行数据分析，计量资料数据用均数±标准差(x±s)表示，两组间比较采用t检验。以P < 0.05 为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 新鲜家兔胆汁紫外光谱、红外光谱图
紫外光谱显示，276 nm和386 nm波长处各有一吸收峰，强度分别是0.419和0.314 (图1)，不同于鸡、牛、猪、鱼羊的紫外光谱(图2)。红外光谱中，指纹区1 015.39～1 090.64 cm-1处有一组特征峰(3个)，在918.26～968.4 cm-1处也有一组特征峰(3个)(图3)。
2.2 家兔胆汁对大鼠动脉体重、血压的影响
模型组大鼠的血压值高于假手术组，两组平均动脉压分别为15.8 kPa和12.8 kPa，说明高血压模型建立成功。而胆汁组大鼠的血压明显较模型组低，平均动脉压从15.8 kPa降到12.3 kPa，说明胆汁降压有效果。同时胆汁组大鼠体重较假手术组及模型组低，但差异无统计学意义(P > 0.05)。见表1。
3 讨论
家兔饲养在中国具有较大的规模，家兔胆汁是其副产品之一，具有独特的理化特性和药理作用，它的开发利用逐渐受到关注，研究清楚其质量标准、药理作用有利于其开发利用。动物胆汁成分和各成分的比例相对固定，其紫外、红外光谱应该是固定不变的，可作为鉴别胆汁的一种可靠方法。刘养清等[2]观察了牛、羊、鱼、鸡、猪等的紫外光谱，结果显示各种动物的紫外光谱形状各异，具有特征性。本实验首次检测了家兔胆汁的紫外光谱，与鸡、牛、猪、鱼、羊等动物胆汁的紫外光谱有明显的区别，家兔胆汁在波长276 nm和386 nm处有吸收，吸收强度分别是0.419和0.314。对于单一化合物，红外光谱可提供化合物的官能团、结构异构、氢键等信息，是研究分子结构的主要手段之一，红外光谱分特征区和指纹区， 4 000～1 250 cm-1范围为特征区，主要来源于含氢原子的单键、各种三键和双键的伸缩振动；4 00～1 250 cm-1范围为指纹区，主要来源于各单键的伸缩振动和多数基团的弯曲振动，弯曲振动的能级差别小，因此指纹区的谱带较密集，指纹区图谱犹如人的指纹，能敏感反应化学结构上的细小差别。动物胆汁虽然不是单一化合物且化学成分复杂，但是其成分固定且各组分比例固定，因此在相同条件下测定其红外光谱应该是一致的。刘养清等[3]证明各种动物胆汁的红外光谱是确定的，可作为鉴别指标之一。本实验所测得的家兔胆汁红外光谱，在特征区与其他动物胆汁无明显区别[4]，在指纹区则有特征性变化，1 015.39～1 090.64 cm-1处有一组3个小峰组成的吸收峰，其中，在1 043.77 cm-1处有一强吸收峰，在918.26～968.4 cm-1处也有一组小吸收峰，可作为鉴别家兔胆汁的可靠指标。
胆汁性寒、味苦，具有多种功效，是我国中药的传统用药，近年胆制剂的研究开发和临床运用取得一定成绩，例如蛇胆川贝液，用于治疗感冒咳嗽、气管炎，受患者青睐；鸡胆汁加糖调匀，治疗小儿百日咳疗效显著；牛黄降压片，降压效果确切，其主要成分是牛黄、冰片等，牛黄中的磺酸去氧胆酸是主要的降压成分。家兔胆汁的胆汁酸提取物制剂也有少量运用于临床，例如利咽灵片，用于治疗小儿急性咽喉炎，也有制成利胆片，用于利胆、促消化。家兔胆汁含去氧胆酸和胆酸两种胆汁酸，比例为9∶1，是提取去氧胆酸的理想材料。吴克霞等[4]证明从家兔胆汁中提取的去氧胆酸有降压作用。杨履艳等[5]报道兔胆粉滤过液能降低垂体后叶素引起的ST段、T波抬高，提示家兔胆汁有扩张血管作用，具有开发为降压药的前景。但在胆汁提取过程中存在提取率低(只有3%)、破坏胆绿素、牛磺酸等降压成分以及引入有毒化学物质等问题。胆汁是体内的正常成分，毒性较低，临床上有直接利用猪胆汁绿豆浸膏治疗高血压[6]的做法，因此，本实验直接观察了家兔新鲜胆汁的降压作用，结果显示，胆汁能降低肾性高血压大鼠的血压，同时还能降低大鼠的体重，这可能与家兔胆汁中去氧胆酸舒张血管和降低血脂的功效有关 ......
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