丙戊酸对大鼠急性脊髓损伤后BDNF及NT-3表达的影响(2)
1 材料与方法1.1 实验动物
选择健康成年雄性SD大鼠60只,清洁级,体重250~300 g,由成都医学院实验动物中心提供。置实验室环境中饲养1周,自由摄食和饮水。
1.2 试剂
丙戊酸(购自杭州赛诺菲安万特民生制药有限公司),兔抗大鼠BDNF一抗,兔抗大鼠NT-3一抗,SABC免疫组化试剂盒和DAB显色试剂盒(均购自武汉博士德生物工程有限公司)。
1.3 脊髓损伤动物模型制作
大鼠术前12 h禁食,自由饮水。1%戊巴比妥(40 mg/kg)腹腔内注射麻醉后,采用改良的Allen法制作脊髓损伤动物模型:大鼠俯卧位固定,无菌条件下暴露T9~11椎板,咬除T10的棘突及椎板,以12.5 mm×10 g的能量撞击,金属杆下落后大鼠迅速出现摇尾反射,双后肢及躯体回缩扑动,表明撞击成功。对照组(C组)只做T10椎板切除术。
1.4 动物分组及处理
60只大鼠随机分为损伤组(SCI组)、丙戊酸保护组(VPA组)和C组,每组又分为伤后24、48、72 h和1周4个时间点,每个时间点5只大鼠。VPA组术后即刻及其后每12 h皮下注射VPA 300 mg/kg;C组和SCI组在相应时间点注射等体积的生理盐水 ......
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