MMP-2、MMP-9及VEGF在结肠癌中的表达及其与肿瘤转移的相关性(2)
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参见附件。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选择2011年3月～2011年12月南京市六合区人民医院收治的经术后病理证实的86例结肠癌患者，术前均未接受放化疗、免疫治疗等抗肿瘤治疗，排除家族性结肠癌病史及其他肿瘤史。86例患者中，男58例，女28例；年龄34～76岁，平均(52.3±4.6)岁；肿瘤部位：左半结肠36例，右半结肠50例；Dukes分期[6]：A期32例，B期11例，C+D期43例；淋巴转移57例，无转移29例。同时取患者距癌灶≥5 cm且经病理证实为正常结肠组织作为对照。
1.2 方法
所有标本经10%甲醛固定后石蜡包埋，行4 μm厚连续切片，然后行HE染色，采用免疫组化SP法检测MMP-2、MMP-9及VEGF，鼠抗人MMP-2、MMP-9抗体、兔抗人VEGF抗体均由武汉博士德生物工程有限公司提供，免疫组化SP试剂盒由福州迈新生物技术开发有限公司提供，严格按照说明书操作，以PBS代替一抗作为阴性对照。阳性对照由试剂公司提供。在40倍光镜下观察免疫组化染色切片，随机选择6个高倍视野，采用医学图像分析系统测量MMP-2、MMP-9及VEGF蛋白表达强度。
1.3 免疫组化染色结果判断
镜下观察肿瘤细胞胞质内出现棕黄色颗粒为阳性，采用半定量积分法[6]进行评分：①阳性细胞百分比：无阳性细胞记0分，<25%记1分，25%～75%记2分，>75%记3分。②显色深浅：阳性细胞按无着色、淡黄色、棕黄色、棕褐色分别记0、1、2、3分。以两项评分之和进行判断，≥3分为阳性，<3分为阴性。
1.4 统计学方法
采用SPSS 15.0统计学软件进行分析，计量资料数据以均数±标准差(x±s)表示，采用配对t检验进行比较；计数资料数据比较采用χ2检验；采用Pearson直线相关分析MMP-2、MMP-9与VEGF表达之间的相关性，以P < 0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
2.1 结肠癌组织与正常结肠组织MMP-2、MMP-9、VEGF阳性表达比较
结肠癌组织MMP-2、MMP-9、VEGF阳性率均显著高于正常结肠组织，差异有高度统计学意义(P < 0.01)。见表1。
表1 结肠癌组织与正常结肠组织MMP-2、MMP-9、VEGF阳性表达比较[n(%)]
2.2 结肠癌组织与正常结肠组织MMP-2、MMP-9、VEGF蛋白表达
86例结肠癌组织平均MMP-2、MMP-9、VEGF蛋白吸光度值均显著高于正常结肠组织，差异有统计学意义(P <0.05)。见表2。
表2 结肠癌组织与正常结肠组织MMP-2、MMP-9、VEGF蛋白表达(x±s)
2.3 结肠癌组织中MMP-2、MMP-9、VEGF阳性表达与肿瘤转移的相关性
86例结肠癌组织中，52例(60.5%)发生淋巴结转移，34例(39.5%)未发生淋巴结转移。有淋巴结转移的结肠癌组织中MMP-2、MMP-9、VEGF阳性表达率高于无淋巴结转移者，差异有统计学意义(P < 0.05)。见表3。
2.4 结肠癌组织MMP-2、MMP-9与VEGF表达的相关性
相关性分析结果显示，MMP-2、MMP-9与VEGF表达之间呈正相关(r = 0.72，P < 0.05)。
3 讨论
肿瘤浸润和转移是决定肿瘤恶性程度的重要因素，而肿瘤ECM及基底膜(basement membrane，BM)的降解和破坏在肿瘤浸润和转移过程中发挥重要作用。MMPs是一类与锌结合的能够降解ECM活性的酶类，其中MMP-2和MMP-9是参与ECM降解的主要成分[7]。本研究发现，结肠癌组织中MMP-2、MMP-9表达水平及阳性率均显著高于癌灶旁的正常结肠组织(P < 0.05、0.01)，且有淋巴结转移的结肠癌组织中MMP-2、MMP-9阳性表达率亦高于无淋巴结转移者(P < 0.05)，与Qin等[8]的研究结果基本一致，提示MMP-2和MMP-9在结肠癌的发生及转移中起重要作用，其可能的作用机制是二者能破坏局部解剖结构，刺激肿瘤的生长；同时破坏基底膜屏障，加速肿瘤转移，刺激肿瘤新生血管的形成[9]。
VEGF是一种糖蛋白二聚体，VEGF及其受体过表达与肿瘤的生长、侵袭、转移及预后密切相关[10-11]。本研究结果发现，结肠癌组织中VEGF表达水平及阳性率显著高于癌灶旁的正常结肠组织(P < 0.05、0.01)，且有淋巴结转移的结肠癌组织中VEGF阳性表达率亦高于无淋巴结转移者(P < 0.05)，提示发生结肠癌时，机体内VEGF表达水平显著增高，且其表达增高与肿瘤转移明显相关。
邓一平等[12]通过转染方式将膜型基质金属蛋白酶导入裸鼠异种移植瘤模型，检测膜型基质金属蛋白酶对肿瘤生长速度和VEGF表达的影响，结果发现 ......
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