c-Met、PTEN在甲状腺癌中的表达及其临床意义(2)
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参见附件。
1 材料与方法
1.1 材料
采集2001年2月～2011年5月山西医科大学附属第一医院病理科甲状腺良恶性肿瘤术后标本，选取108例资料完备的样本，72例甲状腺癌标本，包括男性样本22例，女性样本50例，年龄18～72岁(中位年龄43.4岁)；18例甲状腺腺瘤标本，18例正常甲状腺组织标本。所有病例依据WHO规定之标准对甲状腺癌样本进行分类：其中乳头状癌(PTC)35例，滤泡癌(FTC)25例，未分化癌(UTC)12例；依据2002年TNM(UICC)分期标准进行临床分期：其中Ⅳ期10例，Ⅲ期11例，Ⅱ期35例，Ⅰ期16例，所抽取病例术前均未行放、化疗或免疫治疗。所有石蜡标本均经重新HE染色进行确诊、分类，并对甲状腺癌标本再次进行组织学分级、临床分期及淋巴结转移情况的确定并做表格统计。
1.2 主要试剂
c-Met兔抗人多克隆抗体(ZA-0412，工作液规格1.5 mL)，PTEN兔抗人多克隆抗体(ZA-0251，工作液规格1.5 mL)均为北京中杉金桥生物技术有限公司产品。SP试剂和DAB显色试剂盒由山西医科大学附属第一医院病理科提供。
1.3 方法
所有手术切除标本都用10%福尔马林液固定后在病理科用石蜡常规包埋，以4 μm 厚度用切片机进行连续切片。免疫组化染色SP法严格按照说明书进行实验操作：标本蜡块切片、贴片、烤片，二甲苯脱蜡，梯度酒精水化，柠檬酸微波修复抗原，3%双氧水阻断内源性过氧化物酶活性，分别加入c-Met兔抗人多克隆抗体、PTEN兔抗人多克隆抗体，4℃过夜，滴加生物素标记二抗，DAB显色，苏木精复染，常规脱水，用中性树脂封片。用试剂公司提供之阳性片作为阳性对照，一抗用PBS代替作为阴性对照。
1.4 结果判定标准
研究对象指标PTEN、c-Met蛋白的阳性染色呈棕黄色或棕褐色，PTEN蛋白主要定位于细胞质或细胞核，c-Met蛋白主要定位于细胞质或细胞膜。在肿瘤坏死及边缘区域以外，选择5个高倍视野，在每个所选高倍视野内计数100个瘤细胞，依据染色程度及阳性细胞率，用半定量积分法来计算评分。①染色强度：无色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。②阳性细胞率：阳性细胞<5%为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，≥75%为4分；将两者的评分值相加，< 2分记为阴性(-)，2～3分记为弱阳性(+)，4～5分记为中度阳性(++)，6～7分记为强阳性(+++)。
1.5 统计学方法
运用SPSS 10.0软件进行数据处理。采用χ2检验和Fish确切概率法对数据作组间比较，采用Spearman等级相关分析法进行二指标之间相关分析，P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 c-Met、PTEN在各样本中的表达
比较结果见表1。
2.2 c-Met、PTEN在不同患者中的表达比较
c-Met、PTEN在不同组织学分级、不同病理类型、不同TNM分期和区域淋巴结有无转移的甲状腺癌中的阳性表达率结果比较，差异有统计学意义(P < 0.05)，而与所选样本患者的性别、年龄、肿瘤最大径的大小及肿瘤是否侵出包膜无关(P > 0.05)，见表2。
2.3 甲状腺癌中c-Met和PTEN表达之间的相关性分析
甲状腺癌组织中c-Met和PTEN的表达之间存在负相关(r = -0.340， P < 0.01)，见表3。
表3 甲状腺癌组织中c-Met和PTEN表达间的关系(例)
2.4 c-Met、PTEN在甲状腺乳头状癌、滤泡癌和未分化癌中的阳性表达
见图1～6。
3 讨论
PTEN是近年发现的唯一具有双重磷酸酶(脂质磷酸酶和蛋白磷酸酶)活性的抑癌基因，可使细胞阻滞于G1期，诱导细胞凋亡，从而在细胞的生长、分化、凋亡、黏附、迁移等方面起着重要的调控作用。已有研究表明，PTEN 基因的突变或缺失表达，与多种恶性肿瘤的发生密切相关[7-9]。
本实验结果示：① PTEN蛋白在正常甲状腺及腺瘤组织中的阳性率高于甲状腺癌组织，这可能是由于PTEN蛋白的功能缺失使其对肿瘤细胞生长及对细胞黏附的抑制力减弱；②PTEN蛋白的表达与患者性别、年龄及肿瘤大小、包膜的完整性无明显的关系，而与甲状腺癌组织病理类型、临床TNM分期、肿瘤细胞分化程度、区域淋巴结转移状态有很高的相关性，组织分化程度越低、临床分期越高，PTEN蛋白的表达越低。临床TNM分期Ⅲ、Ⅳ期甲状腺癌组织中PTEN蛋白表达水平明显低于Ⅰ、Ⅱ期。说明PTEN蛋白表达与甲状腺癌的生物学行为和预后密切相关。
c-Met蛋白属于生长因子受体类，具有酪氨酸激酶活性。c-Met蛋白与其配体肝细胞生长因子(HGF)特异结合后可诱导c-Met受体蛋白发生构象改变，导致信号转导途径的级联激活，从而参与调节细胞增殖、运动、存活、形态发生以及组织损伤修复等生物学活动。c-Met蛋白的过表达与多种恶性肿瘤的侵袭及转移密切相关[10-11]。HGF/MET信号通路的异常激活有助于癌变和肿瘤的进展，HGF/MET信号通路的激活增加了蛋白酶产量，通过细胞解离和细胞活动来促使肿瘤的侵袭和转移[12]。此外，HGF/MET信号异常激活可刺激血管内皮细胞，引起血管内皮细胞的增殖和迁移，解除了缺氧对肿瘤生长的限制，增加血管渗透性 ......
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