成纤维细胞生长因子受体2多态性与乳腺癌相关性研究(2)
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参见附件。
1.2.4 PCR反应 反应体系见表2。
rs2912778反应条件：94℃预变性5 min，94℃变性30 s，60℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，30个循环后，72℃延伸7 min。
rs2981578反应条件：94℃预变性5 min，94 ℃变性30 s，66℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，30个循环后，72℃延伸7 min。
rs2981582反应条件：94℃预变性5 min，94℃变性30 s，54℃退火30 s，72℃延伸30 s，30个循环后，72℃延伸7 min。
1.2.5 目的条带成像 制备2%琼脂糖凝胶，以Marker作参照，凝胶成像仪拍照记录。
1.3 统计学方法
Hardy-Weinberg平衡检验，采用SPSS 17.0软件建立数据库，进行χ2检验，P < 0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
2.1 rs2912778
经Hardy-Weinberg平衡检验，对照组各基因型分布频率均符合H-W定律(P > 0.05)。PCR产物的目的条带以及电泳检测的最终结果见图1。rs2912778在两组之间比较差异具有高度统计学意义(P < 0.01)，rs2912778基因型分布在乳腺癌组与对照组之间比较差异有高度统计学意义 (P < 0.01)，等位基因频率在乳腺癌组与对照组之间比较差异无统计学意义(P > 0.05)，见表3。基因型与临床病理方面比较差异无统计学意义(P > 0.05)，见表4。
1为C/T基因型；2、3为T/T基因型；4为C/C基因型；C/C为野生型；
A为乳腺癌组；B为对照组
图1 rs2912778位点C/T多态性目的条带
2.2 rs2981578
经Hardy-Weinberg平衡检验，对照组各基因型分布频率均符合H-W定律(P > 0.05)。PCR产物的目的条带以及电泳检测的最终结果见图2。rs2981578基因型分布在乳腺癌组与对照组之间有高度统计学意义(P < 0.01)，等位基因型频率在乳腺癌组与对照组之间比较差异有高度统计学意义(P < 0.01)，见表5。基因型与临床病理方面比较差异无统计学意义(P > 0.05)，见表6。
2.3 rs2981582
经Hardy-Weinberg平衡检验，对照组各基因型分布频率均符合H-W定律(P >0.05)。PCR产物的目的条带以及电泳检测的最终结果详见图3。FGFR2 rs11200014 基因型分布在乳腺癌组与对照组差异有明显统计学意义 (P < 0.01)，等位基因型频率在乳腺癌组与对照组差异无统计学意义(P > 0.05)，见表7，基因型与临床病理差异无统计学意义(P > 0.05)，见表8。
3 讨论
FGFR2基因编码跨膜酪氨酸激酶,在细胞生长、侵袭和血管生成等方面起重要作用。细胞系的功能研究提示FGFR2通过选择性剪接在C-末端结构域，在肿瘤形成过程中发挥作用[5]。FGFR2与多种肿瘤有关，如乳腺癌、肾癌等[6-7]。乳腺癌变小鼠模型的建立表明FGF信号通路是乳腺肿瘤形成的一个主要因素[8]，在乳腺上皮细胞，FGFR2特异性激活途径可能是依赖于此基因的不同剪接形式的平衡[9-10]。众所周知，FGFR2在人类乳腺癌的ER阳性肿瘤中表达增高，并且已经过ONCOMINE 3.0数据库数据分析所证明[11-12]。然而，FGFR2基因作为乳腺癌风险因子的机制尚未明了。Stacey等[13]研究结果表明FGFR2与雌激素阳性乳腺癌明显相关性。ER、PR、HER-2表达情况，肿瘤的大小、细胞学分级、淋巴结转移情况均为乳腺癌预后因素，因此，本文将基因型与上述因素联系起来，寻找其中的联系，以期找到其相关性。
本文对乳腺癌患者FGFR2基因三个SNP位点rs2912778、rs2981578和rs2981582进行检测，表明此三个位点突变可能是乳腺癌发生的风险因子。在一项亚洲人和欧洲人种联合分析中，rs2981578单核苷酸多态性与乳腺癌风险显著相关[14]。西伯利亚人口研究中，rs2981582多态性与乳腺癌显著相关[15]，另有研究表明，FGFR2基因的rs2912778增加了乳腺癌的患病风险[16]。本文结果与此较一致。与病理资料联系分析时，本文除了rs2912778野生型和变异型与淋巴结转移与否可能相关外，其余三个位点野生型和变异型与临床病理特征无相关性。此结果可能与实验样本例数较少有关，此外，乳腺癌是多因素综合作用的结果，因此仍需更大量的样本进行进一步研究。
在肿瘤形成方面，FGFR2具有双重作用，可以是癌基因，也可以是抑癌基因 ......
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