原子吸收分光光度法快速检测化妆品中金属硫蛋白含量
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[摘要] 目的 快速检测化妆品中金属硫蛋白(MT)含量。 方法 利用原子吸收分光光度法，在检测波长213.9 nm条件下对化妆品样品A、B、C、D进行分析，外标法对化妆品中的MT进行定量测定，探讨该方法的条件。 结果 建立了利用原子吸收分光光度计快速检测食品中MT的分析方法，该方法线性良好，重复性高，加样回收率为92.4%～96.4%。结论 该方法检测化妆品中MT含量具有重大意义，具有一定的先进性和实际意义，可为测定化妆品中的MT提供可靠的手段，能更好地满足实际样品分析。
[关键词] 金属硫蛋白；原子吸收分光光度法；化妆品
[中图分类号] R927 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2012)10(a)-0118-02
金属硫蛋白(metallothionein，MT)是一类广泛存在于生物界、低分子量、富含半胱氨酸、可被金属和其他因素诱导合成的细胞内金属结合非酶蛋白质。MT在生物体内有很重要的生理作用：清除体内自由基、防止机体衰老；解除重金属的毒性；参与体内微量元素的代谢；增强机体对各种不良状态的适应能力；锌元素的贮存库；防止细胞癌变等[1-2]。
利用MT的这些活性，研究其作为食品、化妆品添加剂的应用已成为当今的前沿课题之一。目前测定MT的方法较多，主要有高效液相色谱法和极谱法等，但这些方法的重复性较差，在实际样品中没有得到广泛的应用[3-5]。采用原子吸收分光光度法成功地分析蛋白质已有了大量报道，但由于食品、化妆品成分比较复杂，能成功地测定食品中MT 的方法还未见报道。为此，利用原子吸收分光光度计检测食品、化妆品中MT含量具有重大意义，本实验研究了从化妆品中检测MT的方法，探讨了该方法的条件，建立了利用原子吸收分光光度法快速检测食品中金属硫蛋白的分析方法，取得了比较满意的结果。
1 仪器与试药
原子吸收分光光度计(北京普析通用TAS990AFG)；离心机(日立公司)；匀浆器(上海标本)；0.02 mol/L Tris-HCl(pH 8.6)；Zn标准液0.1、0.3、0.6、1.0 μg/mL；MT纯度为90%，购于北京盛京华公司；化妆品：A(凤凰甘油一号，上海百雀羚日用化学有限公司，产许许可证：XK16-1080418，批号：3B30UJI)，B(大宝SOD蜜，北京大宝化妆品有限公司，批号：1310270A)，C(海派SOD蜜，上海雅美日用化学品厂，生产许可证：XK16-1086809，批号：9D161201)，D(雅霜，上海家化联合股份有限公司，生产许可证：XK16-108 0443，批号：IDDJJ)；硝酸(色谱纯)。
2 方法与结果
2.1 实验方法
分别取10 g化妆品样品A、B、C、D分别加入5 mg/mL MT 10 μL定量加入10 mL硝酸，120℃电热板上加热至白烟。原子吸收设备检测波长：213.9 nm，光谱带宽：0.4 nm，滤波系数：0.3，推荐灯电流：3 mA，负高压：346.25 V，燃烧头高度：6 mm，积分时间：3 s，空气压力：0.24 mPa，乙炔压力及流量：0.05 mPa及1 300 mL/min。
2.2 工作曲线的绘制
分别配制质量浓度为0.1、0.3、0.6、1.0 μg/mL的Zn标准液制定标准曲线，根据标准曲线法求出溶液的Zn含量，按照以下公式计算金属硫蛋白含量：
MT=所测Zn浓度(ppm)/65/7×6 500
2.3 实验结果
2.3.1 工作曲线和线性范围 对0.1、0.3、0.6、1.0 μg/mL标准浓度连续测定3次，结果见图1。平均峰高与含量的线性方程为y = 0.503 7x，相关系数r为0.997 8，提示线性良好。
2.3.2 方法的准确度和重现性 取分别取10 g化妆品样品A、B、C、D分别加入5 mg/mL MT标准液。按实验方法对样品进行处理，定容至10 mL连续做3个平行，计算加样回收率。结果见表1。运用公式可看出用本法测定化妆品中的MT，加样回收率为92.4%～96.4%。
3 讨论
MT的检测方法都是建立在MT的理化特性和生物特性以及免疫学特性基础上，主要分以下几大类：金属亲和分析法，它的缺陷在于，采用的金属除与MT结合外，还与其他一些小分子量化合物结合，由于利用金属含量间接推算MT含量，因此特异性较差；电化学法是一种可以直接用于测定MT总量的方法，具有一定的特异性；色谱分析法主要有HPLC、RP-HPLC、HPLC-ICP-MS、HPLC-AAS等；蛋白质分析法/免疫法，尤其适合于微量检测[6-8]，原子吸收分光光度法测定MT虽已有一些报道，但大多数停留在分离条件的探讨和研究方面，未见应用于实际样品的定量分析，本文利用原子吸收分光光度计快速检测化妆品中的MT含量应用于实际样品的定量分析，该方法重现性较好，操作简单，适于实际样品的分析。因此本文建立的检测方法，具有一定的先进性和实际意义，为化妆品中的MT检测方法的确立奠定了基础。
[参考文献]
[1] 张桂春.金属硫蛋白的功能及应用前景[J].烟台师范学院学报，2005， 21(1)：142-145.
[2] 邢树礼，王洪光.金属硫蛋白的功能及应用前景[J].生物技术通报，2008，(2)：45-48.
[3] Dziegiel P，Jelen M，Muszczynska B，et al. Role of metallothionein expression in non small cell lung carcinomas [J] ......
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