巴戟天醇提物对离体大鼠心肌缺血再灌注损伤后白介素—1β、肿瘤坏死因子—α及心肌细胞凋亡的影响(1)
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[摘要] 目的 探讨巴戟天醇提物对心肌缺血再灌注损伤(IRI)后白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平以及心肌细胞凋亡的影响。 方法 取健康雄性Wistar大鼠80只，随机分为空白对照组、IRI组、巴戟天高剂量组和巴戟天低剂量组四组，每组各20只。利用Langendorff灌流技术制备心肌IRI模型，两个巴戟天用药组分别在预灌时给予相应浓度的药物。灌流结束后，各组取10只大鼠左心室组织，采用ELISA法检测其IL-1β、TNF-α的表达；取另外10只大鼠左心室组织，采用TUNEL法检测其心肌细胞凋亡情况。 结果 与IRI组相比，巴戟天高剂量组和巴戟天低剂量组IL-1β、TNF-α表达降低(P < 0.05)，凋亡指数降低(P < 0.05)。 结论 巴戟天醇提物能够减轻心肌IRI后心肌细胞凋亡，这可能与其能够降低心肌组织中的IL-1β、TNF-α表达有关。
[关键词] 巴戟天醇提物；心肌；缺血再灌注损伤；白介素-1β；肿瘤坏死因子-α；细胞凋亡
[中图分类号] R96 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2012)10(b)-0011-03
心肌缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury，IRI)是指心肌较长时间缺血后恢复血供时心肌损伤反而加重的一种病理生理学现象，目前已经受到广大医学工作者的关注[1]。大量研究表明，炎症反应在心肌IRI的发生、发展过程中发挥着重要作用[2-3]。白介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、黏附分子等炎症因子在心肌IRI的发生、发展过程中均通过各种途径发挥重要作用。巴戟天属于茜草科植物，肉质根可以入药，具有补肾壮阳之功效。以往的研究表明，巴戟天醇提物具有减轻心肌IRI的作用[4]，且这种作用可能与其能够减轻IRI心肌细胞脂质过氧化及细胞凋亡有关，但是关于IL-1β、TNF-α等炎症因子在巴戟天醇提物保护IRI心肌中的变化尚未见报道。因此，笔者利用Langendorff灌流装置制备离体大鼠心脏IRI模型，以期探讨巴戟天醇提物对大鼠心肌IRI后IL-1β、TNF-α表达以及心肌细胞凋亡的影响。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 药品与试剂 巴戟天购自广东省德庆县药材公司，一等品，由河南省食品药品检验所鉴定，由所购生药提取得到巴戟天醇提物；IL-1β、TNF-α酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)检测试剂盒购自美国R&D公司，批号分别为：110521、110430；末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP 缺口末端标记测定[terminal dexynucleotidyl transferase(TdT)-mediated dUTP nick end labeling，TUNEL]法检测试剂盒购自美国Roche公司，批号：13764213211；其他试剂均是国内分析纯。
1.1.2 仪器 Langendorff灌流装置(上海奥尔科特生物科技有限公司)；CASTEAX2100型全自动酶联免疫分析仪(美国Beckman公司)；Biofuge Stratos台式高速低温离心机(德国Heraeus公司)。
1.1.3 实验对象 健康雄性Wistar大鼠，体质量260～303 g，平均(281±18)g，购自河南省实验动物中心。
1.2 方法
1.2.1 离体心脏灌流模型的建立 用腹腔注射质量分数2%的戊巴比妥钠(0.2 μL/g)方法麻醉大鼠，同时注射质量分数2%的肝素钠(0.1 μL/g)抗凝；开胸出取心脏，放于盛有0～4 ℃预冷灌流液的器皿中，冲洗后，于Langendorff灌流装置上开始进行灌流。灌流压：82 kPa；以Krebs-Hanseleit磷酸缓冲液作为灌流液，其成分(mmol/L)如下：NaCl 118，NaHCO3 25.0，KCl 4.7，MgSO4·7H2O 1.2，KH2PO4 1.2，CaCl2 22.5，Glucose 11.0，pH为7.4；渗透压达到300 mOsm/L。灌流前用95% O2+5% CO2混合气体平衡15 min，灌流过程中保持，保持装置内温度处于37 ℃，并持续通气。
1.2.2 分组及处理方法 80只健康雄性Wistar大鼠随机分为空白对照组、IRI组、巴戟天高剂量组和巴戟天低剂量组四组，每组各20只。空白对照组：持续灌流110 min；IRI组：预灌20 min ......
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