姜黄素纳米微粒对体外胃癌MGC803细胞凋亡机制的影响(1)
 |
| 第1页 |
参见附件。
[摘要] 目的 观察姜黄素纳米微粒对人胃癌MGC803细胞凋亡机制的影响。 方法 MTT法建立细胞剂量效应曲线，光镜和电镜下观察细胞形态变化，流式细胞仪分析MGC803细胞周期改变，免疫组化法检测凋亡相关Bcl-2蛋白表达。 结果 MTT法显示，姜黄素纳米微粒抑制胃癌MGC803细胞增殖，呈现剂量-时间依赖性；光镜观察姜黄素纳米微粒组细胞损伤较轻，电镜下核周隙清晰，突触小泡较多；流式细胞仪法显示，姜黄素纳米微粒使胃癌MGC803细胞阻滞于G2/M期；免疫组织化学法显示，姜黄素纳米微粒使凋亡相关Bcl-2蛋白表达下调。 结论 姜黄素纳米微粒诱导人胃癌细胞MGC803凋亡并且延长药物对胃癌MGC803细胞作用时间。
[关键词] 姜黄素；胃癌；细胞凋亡
[中图分类号] R735.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2012)10(b)-0016-04
胃癌是临床上常见的一种恶性肿瘤，严重危害人类的健康。抗肿瘤药物的研究特别是从天然植物中筛选抗肿瘤新药的有效成分，是目前常用的筛选抗肿瘤药物的方法。姜黄素是从姜科植物中提取的一种酚类物质，分子量相对较小，在大多数姜黄制剂中均有此类物质存在。姜黄素的药理作用非常广泛，具有抗氧化、抗肿瘤、清除自由基、抗微生物等多方面作用。姜黄素在水中的溶解度较低，体内吸收较少，可以采用乳化聚合的方法，制备粒径在250 nm左右的表面带正电荷的聚氰基丙烯酸正丁酯包载的姜黄素纳米微粒用作实验研究[1-2]。笔者实验将姜黄素纳米微粒体外作用于人胃癌细胞株MGC803，观察姜黄素纳米微粒对人胃癌细胞株MGC803体外生长抑制、细胞周期改变、凋亡相关Bcl-2蛋白表达的作用。
1 材料与方法
1.1 试剂和仪器
人胃癌MGC803细胞株由中国医学科学院细胞库提供；姜黄素、RPMI-1640培养基、胎牛血清、MTT试剂盒、顺铂、碘化丙啶、RNase A、Bcl-2蛋白单抗及SP试剂盒购于武汉博士德生物公司；姜黄素纳米微粒委托哈尔滨医科大学基础医学院遗传学教研室黄小义博士制备；自动切片机LEICA RM2165德国生产；电子显微镜JEM-1220型由荷兰Philip公司生产；Dydatech MR4000型酶标仪购自Santa Cruz公司；其他均为国产分析醇试剂。
1.2 细胞培养及分组
人胃癌MGC803细胞株购买后常规无菌条件下培养，细胞株稳定后传代，并且冻存细胞为实验所用。实验中无菌条件下培养人胃癌MGC803细胞株，培养液为经过0.22 μm滤膜过滤的RPMI-1640，培养条件为37℃ 5% CO2饱和湿度温箱，用PBS配制的0.15%胰蛋白酶消化细胞传代，收集处于指数生长期的人胃癌MGC803细胞。将人胃癌MGC803细胞分为三组：姜黄素纳米微粒组、姜黄素组、实验对照组，给予对应药物处理，实验对照组不加药。
1.3 方法
1.3.1 MTT法检测人胃癌MGC803细胞的生长抑制情况 将处于指数生长期的MGC803细胞制成1 ×107个/mL细胞悬液，接种于96孔培养板，每孔200 μL，给予不同浓度药物处理，37 ℃ 5% CO2培养箱继续培养24 h后，弃液，加入无血清培养液180 μL，再每孔加入20 μL MTT，于培养箱放置4 h ，弃上清，每孔加DMSO，充分振荡，酶标仪于570 nm检测各孔吸收值。以空白对照组细胞调零，横坐标为时间，纵坐标为细胞抑制率，测定不同浓度姜黄素纳米微粒、姜黄素对人胃癌MGC803细胞在不同时间的生长抑制率，绘制细胞生长抑制曲线。
1.3.2 肿瘤细胞形态学光镜观察 将5×104/mL人胃癌MGC803细胞悬液接种于内铺小玻璃片的24孔培养板内，置于37℃ 5% CO2孵箱内培养后用PBS洗涤两次，瑞氏液染色10 min，再用PBS洗两次，室温干燥，中性树胶封片，光学显微镜下观察人胃癌MGC803细胞形态。
1.3.3 肿瘤细胞形态学透射电镜观察 收集胰蛋白酶消化的人胃癌MGC803细胞107个/mL，2.5%戊二醛预固定2 h，四氧化锇固定，梯度乙醇脱水，透明，浸蜡，石蜡包埋，连续切片，醋酸铀及枸橼酸铅双染色，最后透射电镜(JEM-EX)观察拍照。
1.3.4 流式细胞仪检测细胞周期分布 姜黄素纳米微粒20 μg/mL、姜黄素20 μg/mL分别作用于人胃癌MGC803细胞，培养收集106个/mL细胞，PBS洗涤，乙醇固定，RNase A处理细胞30 min，加PI处理，检测人胃癌MGC803细胞的细胞周期分布，统计实验结果。
1.3.5 免疫组化检测Bcl-2 蛋白的表达 实验各组常规制备人胃癌MGC803细胞，4℃丙酮固定，用单克隆-免疫组化S-P法标记Bcl-2蛋白，PBS代替一抗做阴性对照，DAB显色，PBS洗涤，苏木素染色，脱水，透明，封固，镜下观察拍照，并进行图片分析。
1.4 统计学方法
采用SPSS 12.0统计学软件进行数据分析，计量资料数据用均数±标准差(x±s)表示，三组间比较采用方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。以P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 各组MGC803细胞生长抑制情况
不同浓度姜黄素纳米微粒及姜黄素对人胃癌MGC803细胞的生长均有明显的抑制作用 ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件(3776kb)。