UC—MSC移植对CIA大鼠炎症因子表达水平的(1)
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[摘要] 目的 观察脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells，UC-MSC)移植对胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠血清白介素-1(IL-1)、IL-10、IL-17、IL-18表达水平的影响，以探讨UC-MSC移植对CIA大鼠炎症因子的调控作用。 方法 90只SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、UC-MSC治疗组，每组各30只；采用鸡Ⅱ型胶原加完全弗氏佐剂建立CIA大鼠模型；治疗前后采用关节炎指数(AI)评分对大鼠关节炎症进行评估；以酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组大鼠治疗前后血清IL-1、IL-10、IL-17、IL-18水平变化。 结果 模型组血清IL-1、IL-17、IL-18水平均明显高于同期空白对照组，而IL-10水平则低于同期空白对照组，差异均有统计学意义(均P < 0.05)；UC-MSC治疗组治疗后第1、3周时IL-1、IL-17、IL-18水平低于同期模型组，IL-10水平高于同期模型组，差异均有统计学意义(均P < 0.05)；至第5周上述指标与空白对照组比较，差异均无统计学意义(均P > 0.05)。 结论 CIA大鼠存在免疫功能紊乱，其促炎症因子水平显著增高，抑炎症因子降低；UC-MSC能下调CIA大鼠促炎症因子水平，而上调炎症抑制因子，减轻机体免疫性炎症反应，促进疾病缓解。
[关键词] 脐带间充质干细胞；胶原诱导型关节炎大鼠；炎症因子；免疫调节
[中图分类号] R593 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2012)12(c)-0032-03
类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是以累及周围性小关节为主的系统性、炎症性自身免疫疾病，以关节滑膜细胞增生、炎症细胞浸润及血管翳形成为主要病理特征[1]。脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells，UC-MSC)是来源于脐带华通氏胶的一类多能干细胞，具有独特的免疫调节功能，以抑制炎性反应为主要特征。本文以胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠为研究对象，观察UC-MSC对CIA大鼠炎症细胞因子的调节作用，为临床应用UC-MSC治疗RA提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 实验动物
5周龄，雌性，清洁级SD大鼠，90只，平均体重(175±10)g，购置于南京大学模式动物研究所。
1.2 实验方法
1.2.1 CIA大鼠模型建立 ①分组：90只SD大鼠随机分为三组：空白对照组、模型组、UC-MSC治疗组，每组各30只；②造模：扬州大学医学院实验动物中心清洁级环境中适应性饲养1周，模型组及UC-MSC治疗组在乙醚麻醉下于第1天以每只0.1 mL(含鸡Ⅱ型胶原0.25 mg及0.05 mL完全弗氏佐剂)于SD大鼠右后足跖皮内注射，至第21天同前剂量于大鼠尾根部、左后足跖皮内再次多点激发免疫。空白对照组以生理盐水注射，方法同造模组。
1.2.2 UC-MSC移植 取融合度85%的P3代UC-MSC，用0.25%胰蛋白酶消化，生理盐水清洗3遍，制成浓度为2×106/mL细胞悬液，用1 mL无菌注射器抽吸分装成0.5 mL/支(含1×106个细胞)。于造模完成后1周经大鼠尾静脉注射制备好的UC-MSC悬液0.5 mL/只；空白对照组及模型组同法注射等量生理盐水。
1.3 观察指标
1.3.1 从免疫当日起，采用双人双盲的方式在初免后1、2、3周，及治疗后1～5周，每周观察并采用关节炎指数(AI)评分法评定大鼠关节症状的严重程度。
1.3.2 于UC-MSC移植治疗后第1、3、5周，分别取空白对照组及模型组、UC-MSC组大鼠，麻醉大鼠后，经腹腔静脉取血4 mL置分离胶干燥管中，以3 000 r/min、离心10 min后提取血清，置-20℃冰箱保存待测。用ELISA法检测血清白介素-1(IL-1)、IL-10、IL-17、IL-18。
1.4 AI评分法标准
据关节红肿范围和变形情况对大鼠进行评估。每只大鼠四肢评分相加，总分最高为16分。评价标准：0分=无关节炎；1分=有红色斑点或轻度肿胀；2分=关节部位中度肿胀；3分=严重肿胀，甚至皮肤破溃；4分=严重肿胀且不能负重。
1.5 统计学方法
采用Excel 2003软件及统计软件SPSS 16.0对实验数据进行分析，计量资料数据以均数±标准差(x±s)表示，多组间比较采用方差分析，两两比较采用LSD-t检验。以P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 CIA大鼠一般情况及关节症状
所有CIA大鼠饮食及活动减少，神疲乏力，体重增长减慢；于初次免疫后第2天注射处足踝、趾、膝关节即出现瘀斑、轻度红肿；第6天开始红肿加重，关节处皮肤充血发亮，甚至破溃，关节活动受限伴负重困难、活动障碍，红肿逐步向对侧后肢及双前肢蔓延 ......
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