马钱子优化总生物碱的制备与评价(1)
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[摘要] 目的 通过简单工艺除去大部分士的宁制备马钱子优化总生物碱以实现减毒增效。 方法 利用马钱子碱与士的宁在50%乙醇中的溶解度相差悬殊的原理除去马钱子总生物碱中的大部分士的宁制备马钱子优化总生物碱。酸性染料法测定纯度，HPLC法测定其中马钱子碱和士的宁的含量变化，比较优化前后马钱子总生物碱的急性毒性以及对小鼠耳肿胀的抑制作用。 结果 制得的马钱子优化总生物碱以马钱子碱计，纯度为(100.66±1.84)%(n = 3)，优化前后马钱子碱与士的宁的含量比例从1∶1.8上升到2.7∶1。优化后马钱子总生物碱的毒性显著下降，LD50比优化前提高了4.8倍。马钱子优化总生物碱的抑制耳肿胀活性显著优于马钱子总生物碱。 结论 马钱子优化总生物碱可以实现减毒增效，提高治疗指数。
[关键词] 马钱子；总生物碱；士的宁；马钱子碱；急性毒性
[中图分类号] R285.1 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2012)12(c)-0035-03
传统大毒中药马钱子，又名番木鳖，是马钱科植物马钱(Strychnou nux-vomica L.)的干燥成熟种子，最早的记载见于《本草纲目·卷十八》，药理学研究表明其具有消肿止痛、抗炎、抗肿瘤等药理作用，因此，在中医药临床上得到广泛应用，可用于治疗风湿痹痛、面神经麻痹、肿瘤等疾病。
实验研究证实马钱子中的总生物碱为其主要有效成分，而总生物碱中又含有至少16种的生物碱成分[1]，其中马钱子碱和士的宁为其主要成分，两者的含量分析多以单独进行[2-3]，研究表明两者的总含量约占总生物碱的一半。其中，士的宁的毒性是马钱子碱的45～71倍[4-5]，且药效学研究表明其在消肿止痛方面几乎没有活性[6]，因此，本文利用的宁和马钱子碱在50%乙醇中溶解度相差悬殊的原理除去马钱子总生物碱中大部分士的宁，从而得到马钱子优化总生物碱，并进行了成分分析、安全性与药效评价，对于具有高度安全性的马钱子制剂的开发无疑具有重要的意义。
1 仪器与试药
1.1 仪器
日本岛津LC-20A高效液相色谱仪；AS1201自动进样器(大连依利特分析仪器有限公司)；UV2800AH紫外分光光度计(优尼柯仪器有限公司)；BS124S电子分析天平(德国赛多利斯公司)；RE-52A旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)；循环水式真空泵，型号SHZ-D(Ⅲ)(巩义市予华仪器有限责任公司)；PHS-3C PH计(上海雷磁公司)；真空干燥箱，型号DZF-6020(上海精宏实验设备有限公司)。
1.2 试剂
本实验中所使用的马钱子为浙江中医药大学中药饮片厂生产(生产批号：20090219)，经南京中医药大学蔡宝昌教授鉴定证实为马钱科植物马钱(Strychnos nux-vomica.L.)的干燥成熟种子；士的宁对照品(中国药品生物制品检定所)，马钱子碱对照品(中国药品生物制品检定所)；乙腈(色谱纯，美国TEDIA公司)，其余试剂均为分析纯。
1.3 动物
ICR小鼠，许可证号：SCXK(苏)2007-0001，雌雄各半，体重18～22 g，购自扬州大学比较医学中心。
2 方法与结果
2.1 马钱子总生物碱的提取与纯化
称取生马钱子粉末50 g，过50目筛，以15倍量的70%乙醇回流提取半小时，共重复操作3次，合并3次所得滤液，用旋转蒸发仪将滤液真空干燥浓缩至干粉末状，取1 mol/L盐酸100 mL将粉末溶解，以4 000 r/min离心10 min，取得上清液，用40%NaOH将pH调整为12，用二氯甲烷萃取后合并二氯甲烷萃取液，真空干燥并精密称重，得到马钱子总生物碱，得率为(3.11±0.33)%(n = 5)。
2.2 马钱子优化总生物碱的制备
称取马钱子总生物碱粉末共100 mg，用60 mL 50%乙醇将粉末溶解，置于真空干燥箱中浓缩，烧瓶内壁上可见大量白色结晶析出，取浓缩液水浴继续浓缩至原体积的8%后，4 000 r/min离心10 min，倒出上清液，4℃冰箱中静置过夜，4 000 r/min离心20 min后弃沉淀，取得上清液置于真空干燥箱中60℃真空过夜，精密称重，得到优化马钱子总生物碱，得率为(43.85±0.33)%(n = 5)。
2.3 马钱子优化总生物碱的成分分析
2.3.1 酸性染料比色法测定纯度[7]
磷酸氢二钠1.681 8 g，磷酸二氢钠0.315 1 g，用水溶解，定容至100 mL得pH 7.2磷酸盐缓冲液。取pH 7.2的磷酸盐缓冲液，溶解溴麝香草酚蓝12.5 mg，定容至50 mL得显色液。
分别取马钱子优化总生物碱和马钱子碱适量，以氯仿定容，配制为0.10 mg/mL的氯仿溶液，制备供试液与对照品溶液。
取氯仿样品溶液和对照品溶液各0.5 mL至锥形瓶，60℃真空干燥，加入4 mL显色液，涡旋1 min，再加入6 mL氯仿，涡旋2 min，移至分液漏斗 ......
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