壮药苦丁茶和罗汉茶提取物的体外抗肿瘤活性实验(1)
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[摘要] 目的 考察苦丁茶叶和罗汉茶叶两种壮药70%乙醇提取物的体外抗肿瘤活性，为这两种壮药的综合应用研究提供实验依据。 方法 采用四甲基噻唑蓝(MTT)法检测苦丁茶叶和罗汉茶叶的提取物对SGC-7901、SK-OV-3、7404、CNE-1及H460 5种肿瘤细胞株的抗肿瘤增殖作用，计算抑制率。 结果 苦丁茶叶和罗汉茶叶提取物对5种肿瘤细胞株均无明显的抑制作用，其抑制率均低于50%。 结论 此研究结果为苦丁茶叶和罗汉茶叶的应用评价提供活性研究基础方面的依据。
[关键词] 苦丁茶；罗汉茶；抗肿瘤；四甲基噻唑蓝
[中图分类号] R284 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2013)01(a)-0018-03
苦丁茶为冬青科植物苦丁茶Ilex kudingcha C. J. Tseng的干燥叶，在我国南部和西南部民间使用历史悠久，在广西有丰富的药用植物资源，已收载于广西壮药质量标准第二卷(2011年版)中，有清热解毒、杀菌消炎、健胃消肿、止咳化痰、生津止渴、抗辐射等功效[1-2]，其主要化学成分有三萜、皂苷类化合物[3-9]及黄酮[10]等。有文献报道[11-13]，苦丁茶水提物可改善D-gal衰老模型小鼠的学习记忆能力，降低血脂水平，抑制金黄色葡萄球菌及大肠埃希菌。有文献报道[14]，与苦丁茶同科属植物冬青(Ilex chinensis)的氯仿提取物对SMMC7721、Bel7402、HO8910和SGC7901有一定的抑制作用。
罗汉茶为胡桃科植物黄杞Engelhardia roxburghiana Wall.的干燥叶，在广西也有丰富的药用植物资源，已载于广西壮药质量标准第二卷中(2011年版)，有清热解毒、生津解渴、解暑利湿之功效。文献报道其能抗血栓、抗凝血、降血脂及对大鼠实验性脑缺血有一定的保护作用[4]。
本文对广西资源较丰富的两种壮药苦丁茶叶和罗汉茶叶70%乙醇提取物进行体外5种肿瘤细胞株的抗肿瘤活性试验，旨在为该类药物的新开发及市场开拓提供依据。
1 仪器与试药
1.1 生药材
苦丁茶2011年8月采于广西天等县，罗汉茶于2011年11月采于广西十万大山，两份生药标本均由赖茂祥研究员分别鉴定为冬青科植物苦丁茶Ilex kudingcha C. J. Tseng的干燥叶和胡桃科植物黄杞Engelhardia roxburghiana Wall.的干燥叶。两种生药标本均存放于广西医科大学药学院。
1.2 细胞株
人肝癌细胞株(7404)、人高分化鼻咽癌细胞株(CNE-1)、人胃腺癌细胞株(SGC-7901)、人大细胞肺癌细胞株(H460)及卵巢癌细胞株SKOV-3均购自中国科学院上海细胞生物研究所细胞库。
1.3 试剂
RPMI-1640培养基购自HyClone公司；二甲基亚砜(DMSO)购自Solarbio公司；四甲基噻唑蓝(MTT)购自Amresco公司；胎牛血清购自杭州四季青公司；胰蛋白酶消化液购自Solarbio公司；青链霉素混合液购自Solarbio公司；5-氟尿嘧啶注射液(5-Fu)购自上海旭东海普药业有限公司(批号：110404)。
1.4 仪器
YJ系列洁净化工作台(苏州亚净公司)；CO2培养箱(美国Thermo公司)；TDL-5A型离心机(上海菲恰尔公司)；MK3酶标仪(美国Thermo公司产品)；XD-101倒置生物显微镜(南京江南公司产品)。
2 方法与结果
2.1 受试药提取
取苦丁茶(500 g)、罗汉茶(510 g)干燥粗粉，分别用15倍量70%乙醇回流提取3次，合并提取液，减压回收溶剂，冷冻干燥，得苦丁茶粗提物(Ⅰ)(16.54 g，得率为19.85%)和罗汉茶粗提物(Ⅱ)(22.88 g，得率为22.43%)，密封，干燥环境中保存，备用。
2.2 细胞培养
5种细胞(H460、SKOV-3、CNE-1、SGC-7901和7404)均培养于含10%FBS，100 U/mL青霉素和100 μg/mL链霉素的1640培养基中，细胞放置于37℃，5%CO2，相对湿度为95%的CO2培养箱中培养。
2.3 MTT实验
取对数生长期细胞制成细胞悬液，各细胞株稀释浓度：H460为8×104个/mL，SKOV-3为5×104个/mL，CNE-1为5×104个/mL，SGC-7901为1×105个/mL，7404为1×105个/mL，分别种于96孔板中，100 μL/孔，按“2.2”项下方法培养12～18 h后加药，吸弃原培养基 ......
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