HPLC法测定维A酸的平衡溶解度及表观油水分配系数(2)
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2.7.2 正辛醇中的溶解度 称取维A酸50 mg置棕色量瓶中，加正辛醇10 mL溶解，32℃振摇24 h，静置观察，若维A酸完全溶解，则继续加维A酸，每次50 mg，32℃振摇24 h至溶液达到饱和，恒温静置12 h，精密吸取2 mL置50 mL棕色量瓶，加甲醇稀释至刻度，摇匀；再精密吸取2 mL置50 mL棕色量瓶，加流动相稀释至刻度，摇匀。经外标法计算得维A酸在正辛醇中的溶解度为6.25 mg/mL。
2.8 表观油水分配系数的测定
人体皮肤pH值为4.5～6.5，平均5.75，体表温度32℃，为模拟人体环境，故选择pH 5.8的磷酸盐缓冲体系，并在32℃下进行试验。
2.8.1 水相的配制 按《中国药典》2010年版二部附录ⅩⅤ D配制磷酸盐缓冲液(pH=5.8)100 mL。油相为正辛醇溶液。
2.8.2 水饱和正辛醇溶液及正辛醇饱和水溶液的制备 分别量取60 mL油相和水相溶液置于分液漏斗中，32℃下振摇12 h，静置过夜。上层为磷酸盐饱和的正辛醇，下层为正辛醇饱和的磷酸盐缓冲液。
取维A酸12.5 mg，精密称定，置50 mL棕色量瓶中，加磷酸盐饱和的正辛醇溶解，并稀释至刻度，摇匀。精密吸取该溶液15 mL，精密吸取正辛醇饱和的磷酸盐溶液15 mL，置分液漏斗中，充分振摇，于32℃恒温静置至水相澄清。精密吸取上层油相2 mL至50 mL棕色量瓶中，以流动相溶液稀释至刻度，摇匀，作为油相供试品溶液。同时，精密吸取下层正辛醇饱和的水溶液20 μL作为水相供试品溶液。
精密称取维A酸对照品12.5 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀。继续精密吸取2 mL至50 mL棕色量瓶中，以流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
分别精密量取供试品溶液和对照品溶液20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图。由外标法计算油相及水相中维A酸的浓度，分别记作C1，C2，按公式计算表观油水分配系数：Papp=C1/C2，lgP = lgC1/C2。其中，C1为药物分配平衡时，维A酸在正辛醇中的浓度，C2为维A酸在水中的浓度。经过外标法计算得，表观油水分配系数为36 079.8，lgP值为4.55。
3 讨论
3.1 流动相的选择
先通过调整甲醇和水的比例来选择最佳保留时间。当甲醇比例在81%～90%时，提高甲醇比例能大幅缩短主峰的保留时间，但当甲醇比例大于90%时，主峰保留时间略有缩短，分离度降低，但过小的保留时间不利于主峰前杂质完全分离。若保留时间过长，则造成分析效率降低、检测成本增加。综合考虑，选择甲醇-水的比例为90∶10。
再通过改变流动相中冰醋酸比例来调整峰型。将表1编号2、3、9，5、6，7、8号列为三组，比较同组的试验结果，可以看出，当冰醋酸比例变大时，可以缩短保留时间，主峰拖尾因子略微升高，但分离度降低，综合考虑冰醋酸比例还是0.4最佳。
因此，选择最佳流动相比例为：甲醇-水-冰醋酸(90∶10∶0.4)。
3.2 油水分配系数的意义
药物在体内的溶解、吸收、分布、转运与药物的水溶性、脂溶性有关，即和油水分配系数有关。药物要有适当的脂溶性，才能透过生物膜[9]，而水溶性有利于药物在体液内转运，达到作用部位与受体结合，从而产生药效，所以药物需要有适当的油水分配系数。
一般认为油水分配系数对数的最佳值，lgP在-1～2[10]。在此范围内，药物最易透皮。测量出的lgP大于2，表明本品属于强脂溶性药物(lgP > 4)，不宜作透皮用，同时，鉴于维A酸的毒副作用，笔者不建议本药品透皮。因此，油水分配系数的测定对剂型的预测有一定的指导意义。
[参考文献]
[1] 张强，郑继海.实用临床药物手册[M].郑州：郑州大学出版社，2009：213-213.
[2] 王春艳，刘文君.急性白血病对维A酸耐药及其逆转研究进展[J].实用儿科临床杂志，2011，26(3)：216-219.
[3] 汪涛，邓树海.HPLC法测定维A酸在小鼠骨髓中的含量[J].中国新药杂志，2010，19(16)：1474-1472.
[4] 邵凤.维A酸软膏中抗氧剂的初步筛选[J].中国药房，2001，12(12)：714-715.
[5] 魏立明，宋霞，宋三孔，等.HPLC双波长法同时测定复方维A酸软膏中2主药的含量[J].中国药房，2012，23(8)：737-739 ......
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