新癀片活血化瘀作用机制研究(1)
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[摘要] 目的 研究新癀片活血化瘀作用的机制。 方法 采用大鼠体内血栓形成试验、大鼠血瘀模型血流变试验、大鼠血小板聚集试验观察新癀片对血液流变学、血流动力学以及血小板聚集等方面的作用，以及进行肝组织基因芯片检测，研究新癀片活血化瘀作用的机制。 结果 与对照组比较，新癀片能显著抑制体内血栓形成时间(P < 0.05)，能降低血瘀模型全血黏度及血浆黏度(P < 0.01)，中剂量组显著性更明显(P < 0.001)，能显著抑制血小板聚集(P < 0.001)，基因芯片显示，新癀片各组均显著下调肝组织内皮素转化酶样1蛋白、纤维蛋白原β链、凝固因子Ⅲ、A型内皮素受体、血小板激活因子受体的基因表达。 结论 新癀片的活血化瘀作用主要是通过减少血小板活化因子受体、凝固因子Ⅲ的基因表达，从而抑制血小板聚集；减少纤维蛋白原表达，改善血浆黏度及延长血栓形成时间；改善红细胞变形能力，抑制红细胞聚集从而改善全血黏度；减少内皮素转化酶样1蛋白、A型内皮素受体基因表达，从而抑制内皮素发挥缩血管活性，改善血流灌注。
[关键词] 新癀片；活血化瘀机制；血栓；血小板；纤维蛋白原
[中图分类号] R969 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2013)01(c)-0018-03
新癀片由厦门中药厂有限公司生产，其主要由肿节风、三七、牛黄、珍珠粉层等药物组成，含2.11%吲哚美辛，临床上主要用于清热解毒、活血化瘀、消肿止痛等。其中药成分肿节风有清热祛风、活血化瘀功能，三七中的三七皂苷亦有活血化瘀、改善微循环的作用。本实验主要是通过建立大鼠血栓、血瘀、血小板聚集模型及利用基因芯片来探讨新癀片的活血化瘀机制。
1 材料与方法
1.1 药品
新癀片：淡棕灰色的片，气香、微腥，味苦，含吲哚美辛2.11%，批号：111004；吲哚美辛：白色粉末，批号：101206；均由厦门中药厂有限公司提供。复方丹参滴丸，天津天士力制药股份有限公司，批号：111111。
1.2 动物
SD大鼠，SPF级，体重180～200 g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号：SCXK(京)2007-0001。动物饲养在天津市新药安全评价研究中心实验动物屏障系统[合格证：SYXK(津)2011-0005]，食用鼠专用料(北京科澳协力饲料有限公司生产)，饮用纯净水。
1.3 实验仪器
BT87-3型实验性体内血栓形成仪。LG-R-80C型血液黏度仪，由北京中勤世帝科学仪器有限公司生产。
1.4 实验方法
1.4.1 对大鼠体内血栓形成的影响 60只SD大鼠，雌雄各半。按照体质量随机分为对照组、新癀片(高、中、低)组、吲哚美辛组、复方丹参滴丸组，每组10只。每日灌胃给药1次，连续给药9 d，对照组灌胃给予同体积去离子水。末次给药后40 min，腹腔注射45 mg/kg戊巴比妥纳麻醉动物，大鼠仰卧位固定，分离右侧颈总动脉。将血栓形成仪的刺激电极置于颈总动脉近心端，温度探头置于远心端，刺激电流强度为2 mA。刺激5 min后，关闭刺激电极，3 min后，调节温控表至零位，记录从刺激开始至动脉温度骤降所需的时间(s)，即动脉血栓形成时间。
1.4.2 对大鼠血流变的影响 70只SD大鼠，雌雄各半。按照体重随机分为对照组、模型组、新癀片(高、中、低)组、吲哚美辛组、复方丹参滴丸组，每组10只。每日灌胃给药1次，连续给药10 d。对照组及模型组灌胃给予同体积去离子水。末次给药后1 h，除对照组外，其余各组大鼠尾静脉注射10%高分子右旋糖苷(HMWD)溶液0.3 mL/100 g。20 min后，1%戊巴比妥钠麻醉动物，于造模后30 min腹主动脉取血约4 mL加入加有抗凝剂肝素钠的真空采血管中，混匀。取0.8 mL全血，置入血液黏度仪中，测定切速为200 s-1、30 s-1、5 s-1、1 s-1时的黏度，将余下全血于离心机3 000 r/min离心10 min，取0.8 mL血浆，测定血浆黏度。
1.4.3 对大鼠血小板聚集的影响 选用60只SD大鼠，雌雄各半。分组及给药剂量同“1.4.1”，连续给药8 d。末次给药后40 min， 1%戊巴比妥钠麻醉动物，腹主动脉取血约4 mL加入真空采血管中(普通管)，迅速加入新鲜配制的3.8%枸橼酸那0.45 mL混匀(血∶抗凝剂=9∶1)。于离心机800 r/min离心10 min，分离富血小板血浆；3 600 r/min离心10 min，分离贫血小板血浆，作为仪器空白对照。取富血小板血浆250 μL加入聚集管中，用血小板聚集仪测定加入10 μL 1 mg/mL的ADP后的血小板聚集率。
1.4.4 对大鼠肝组织相关蛋白基因表达的影响 选用SD种大鼠60只，全雄，体质量180～210 g。按照体质量随机分为对照组、新癀片组(180 mg/kg)、吲哚美辛组(3.8 mg/kg)。每日灌胃给药1次，连续给药2周。对照组灌胃给予同体积去离子水。末次给药后40 min，1%戊巴比妥钠麻醉动物，每组取肝组织3份液氮保存，进行基因表达芯片检测。
1.5 统计学方法 ......
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