羧甲基茯苓多糖脂质体的制备及其包封率的测定(2)
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参见附件。
2.2.3 标准曲线的制备
精密称取CMP 10 mg于100 mL容量瓶中，用二次蒸馏水定容至100 mL，振摇得浓储备液。精密量取浓储备液适量于50 mL的容量瓶中，加二次蒸馏水定容至刻度，制备浓度分别为1、10、20、50、100 mg/L的溶液，以二次蒸馏水为空白溶液，于298 nm波长处测定吸收度。
2.3 羧甲基茯苓多糖脂质体包封率的测定
量取羧甲基茯苓多糖脂质体溶液2 mL，加pH 7.8的PBS缓冲液2 mL混匀，待脂质体凝聚，然后于电动离心机(2 000 r/min)上离心30 min，将上清液定量稀释；另外量取羧甲基茯苓多糖脂质体溶液2 mL，加入无水乙醚2 mL破坏脂质体后，用PBS定量稀释，然后于扫描到的紫外吸收的最大吸收峰所对应的波长处测定上清液和总药的吸收度，带入标准曲线，计算羧甲基茯苓多糖的浓度，按下式计算药物的包封率：包封率=(C总-C上清/C总)×100%，其中，C上清为上清液中所测得药物浓度，C总为羧甲基茯苓多糖脂质体测得的药物浓度[10]。
2.4 结果
2.4.1 含量测定方法学考察
2.4.1.1 紫外扫描结果表明，在298 nm波长处羧甲基茯苓多糖有最大吸收，见图1。
2.4.1.2 以CMP的吸收度A对CMP的浓度C进行线性回归，得线性方程为：A = 0.006 7C+2.694，r = 0.992 0，羧甲基茯苓多糖在1～100 mg/L浓度范围内吸光度(A)与浓度(C)线性良好。羧甲基茯苓多糖在浓度为1、10、20、50、100 mg/L时，吸光度分别为2.74、2.765、2.78、2.99、3.39，见图2。
2.4.2 羧甲基茯苓多糖脂质体包封率的测定
不同浓度的羧甲基茯苓多糖脂质体有不同的包封率，在1～50 mg/L之间包封率明显增加，而在50～100 mg/L之间则有所下降，并且在50 mg/L处包封率值最大。见表1。
3 讨论
羧甲基茯苓多糖为水溶性物质，因脂质体对水溶性药物的包封率较低，适合水溶性药物脂质体的制备方法为逆向蒸发法[11]。但由于受实验条件的影响，本文中羧甲基茯苓多糖脂质体的制备采用薄膜分散法制备，旨在寻找适合制备羧甲基茯苓多糖脂质体的最佳药物浓度，并且采用离心分离法测定脂质体的包封率[12]。而在脂质体的质量评价中则需要考察：形态与粒径及其分布，包封率，渗漏率，磷脂的氧化程度，氧化指数的测定，有机溶剂残留量等是否符合要求[13]。受实验条件的限制，本文只做了脂质体包封率的测定，如果在条件允许的情况下，则应该对上述几点做一个全面的检测[14-15]。此外，还可以单独就影响包封率的因素方面进行展开，探讨最佳的制备工艺：磷脂的最佳配比(合适的配比可以提高脂质体的稳定性和包封率)，最佳的反应温度(温度影响在脂质体的稳定性和包封率)，最佳的油水比(油水比过小时，不能很好的形成较稳定的油包水形乳液；油水比过高时，则脂质体中包封的水溶性药物绝对量太少)等一系列工艺[16-17]。
在剂型改造基础上，对羧甲基茯苓多糖脂质体进行了药效学和药代动力学研究，认识香菇多糖脂质体的药效作用、在机体内的作用机制、代谢规律和给药途径及剂量提供宝贵的参考数据是本课题进一步研究的方向。
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