甲泼尼龙对百草枯中毒大鼠肾脏损伤的保护作用(1)
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[摘要] 目的 探讨甲泼尼龙对百草枯中毒大鼠肾脏损伤的保护作用及其作用机制。 方法 将30只健康SD大鼠随机分为百草枯模型组、甲泼尼龙治疗组和对照组，每组各10只。分别在第1、3、7天取各组大鼠舌下静脉血，检测血尿素氮(BUN)和血清肌酐(Cr)水平，在第7天分离各组大鼠肾组织观察病理结果变化，免疫组化SABC法染色，观察肾脏巨噬细胞移动抑制因子(MIF)的表达情况。 结果 血BUN和血清Cr水平：与对照组比较，百草枯模型组第3、7天水平升高(P < 0.05)，与百草枯模型组比较，甲泼尼龙治疗组第3、7天水平降低(P < 0.05)。大鼠肾脏病理改变：与对照组比较，百草枯模型组改变有结构紊乱、变性坏死、炎症细胞浸润、充血水肿等；与百草枯模型组比较，甲泼尼龙治疗组改变显著减轻。肾小管细胞MIF表达：与对照组相比，百草枯模型组MIF表达增多(P < 0.05)；与百草枯模型组相比，甲泼尼龙治疗组MIF表达减少(P < 0.05)。 结论 甲泼尼龙可能是通过减少MIF表达，抑制炎症反应，从而减轻百草枯对大鼠肾脏的损伤。
[关键词] 甲泼尼龙；百草枯；巨噬细胞移动抑制因子
[中图分类号] R332 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2013)02(a)-0011-03
百草枯(paraquat)是一种快速灭生性除草剂，具有一定内吸作用和触杀作用。百草枯会导致肝、肾、肺等多器官衰竭，对人体毒性极大，且无特效药，口服中毒死亡率可达90%以上[1]。甲泼尼龙能有效治疗百草枯中毒[2-4]，但是目前研究主要集中在甲泼尼龙治疗百草枯中毒肺损伤，甲泼尼龙对百草枯中毒肾脏损伤的保护作用及机制研究却鲜有报道。肾功能损伤不仅能加重多器官功能障碍综合征(MODS)，而且直接导致百草枯中毒患者死亡[5]。本实验详细探讨甲泼尼龙能否减轻百草枯对大鼠肾脏的损伤及其可能机制，为临床治疗百草枯中毒造成肾损伤提供科学依据。
1 材料与方法
1.1 材料
体重300～350 g雄性SD大鼠30只，由第四军医大学实验动物中心提供，实验前所有大鼠均饲养于动物室，所有大鼠均可自由进食与饮水，室内温度保持在(25±1)℃。兔抗大鼠巨噬细胞移动抑制因子(MIF)抗体(北京博奥森生物技术有限公司)。尿素氮(BUN)试剂盒，肌酐(Cr)试剂盒(南京建成生物工程研究所提供)。
1.2 百草枯肾脏损伤动物模型制备
一次性腹腔注射20%百草枯25 mg/kg建立百草枯中毒模型，参照张建集等[6]的大鼠百草枯中毒模型。
1.3 实验设计与分组
将30只SD大鼠，随机分为三组，每组各10只，分别为，①对照组：一次性腹腔注射生理盐水2 mL，3 h后予1 mL生理盐水腹腔注射；②甲泼尼龙治疗组：一次性腹腔注射20%百草枯25 mg/kg，3 h后予80 mg/kg甲泼尼龙一次性腹腔注射；③百草枯模型组：一次性腹腔注射20%百草枯25 mg/kg，3 h后予1 mL生理盐水腹腔注射。
1.4 指标的检测
1.4.1 血Cr和BUN的测定 各组在建模后，第1、3、7天分别取大鼠舌下静脉血，以4 000 r/min离心10 min，制备血清，于-70℃下冻存待测。按照试剂盒说明测定血清Cr、BUN水平。
1.4.2 光镜检查 各组大鼠在建模后第7天，用过量的水合氯醛麻醉处死大鼠，快速开胸后用4%多聚甲醛(4℃，PBS配制，pH 7.4)固定，取大鼠双侧肾脏，经脱水、包埋、切片、染色后光镜下观察肾脏病理变化。
1.4.3 免疫组织化学染色 全部操作按试剂盒说明书完成，采用SABC法对肾脏组织进行免疫组化染色。每批染色均设立阴性对照(用PBS代替一抗)。免疫组化阳性表达计算方法为：在高倍镜(×400)下计数10个视野的阳性表达肾小管数，取均值表示，MIF表达阳性细胞主要呈棕黄色。
1.5 统计学方法
采用SPSS 17.0软件进行统计学分析。计量资料数据以均数±标准差(x±s)表示，组内用配对t检验，组间用秩和检验。以P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 三组大鼠不同时间点血肌酐和血尿素氮的比较
具体比较结果见表1。
2.2 三组大鼠肾小球、肾小管免疫组化染色结果
甲泼尼龙治疗组肾细胞轻微充血、肿胀，炎症细胞浸润及细胞坏死减少；百草枯模型组肾脏表面有小血点，显微镜下上皮细胞肿胀，空泡变性、坏死、核固缩及肾小球结构紊乱等；对照组未见炎症细胞浸润及水肿，且肾脏组织结构清晰完整(图1)。
2.3 三组大鼠MIF蛋白表达的比较
肾小管细胞MIF阴性不着色，肾小管细胞MIF阳性呈棕褐色，肾小管细胞MIF强阳性呈深棕色。免疫组化染色的结果显示，肾小管细胞的MIF阳性细胞，与对照组相比，模型组表达增多；与模型组相比，治疗组表达减少(图2、表2)。
3 讨论
百草枯进入机体后，生成超氧阴离子及联吡啶阳离子，在超氧化物歧化酶作用下前者形成具有高活性的氧自由基的过氧化氢，从而致使组织器官脱脂质氧化，造成脏器功能损伤，引发MODS ......
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