巴戟天醇提物对D—半乳糖致衰老大鼠免疫功能的影响(1)
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[摘要] 目的 探讨巴戟天醇提物对D-半乳糖致衰老大鼠免疫功能的影响。 方法 50只健康雄性Wistar大鼠随机均分为空白对照组、模型对照组、维生素E组、巴戟天高剂量组和巴戟天低剂量组，每组各10只。利用D-半乳糖制作衰老大鼠模型，并用维生素E及两种不同剂量的巴戟天醇提物进行灌胃。给药结束后，检测大鼠的胸腺指数、脾脏指数、T淋巴细胞转化指数、B淋巴细胞转化指数、白介素-2(IL-2)水平以及CD28阳性淋巴细胞数。 结果 与模型对照组比较，维生素E组、巴戟天高剂量组和巴戟天低剂量组胸腺指数、脾脏指数、T淋巴细胞转化指数、B淋巴细胞转化指数、IL-2水平以及CD28阳性淋巴细胞数明显升高，差异均有统计学意义(均P < 0.05)。 结论 巴戟天醇提物能够增强D-半乳糖致衰老大鼠的免疫功能，可能具有延缓衰老的作用。
[关键词] 巴戟天醇提物；D-半乳糖；免疫功能；刺激指数；白介素-2；CD28
[中图分类号] R393 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2013)02(a)-0017-03
近年来，我国人口老龄化趋势明显呈上升趋势，随之而来的因衰老引起的社会和医学问题严重困扰着广大学者，因此，关于如何延缓衰老的问题成为了目前生命科学工作者所关注的热点。研究表明，衰老是机体随着年龄的增长而出现的多种器官、组织等发生的退行性改变，属于一种自然生理现象，衰老的形成受多种因素的影响，机体所表现出来的体征等也多种多样，例如行动迟缓、记忆力下降以及免疫功能降低等[1]。
巴戟天最早是作为一种壮阳中药应用于一些基础研究和临床的，后来研究发现其具有补肾壮阳、增强性欲、抗肿瘤、缓解抑郁症状以及抗衰老等多种作用，作为提取自巴戟天的巴戟天醇提物也具有类似的作用[2-3]。以往的研究证实，巴戟天醇提物通过抗氧化以及抗凋亡而发挥其抗衰老作用的[4]，而关于其对衰老大鼠免疫功能的影响尚未有报道。因此，作者旨在通过将巴戟天醇提物应用于D-半乳糖致衰老大鼠模型来探讨其对衰老大鼠免疫功能的影响。
1 材料与方法
1.1 试剂
巴戟天醇提物提取自巴戟天(一等品，广东省德庆县药材公司，河南省食品药品检验所鉴定)；脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)、刀豆素(canavalin，ConA)(批号：20120203、201200123，美国Sigma公司)；大鼠白介素-2(IL-2)，定量酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)试剂盒(批号：20120417，美国RD公司)；PE-兔抗大鼠CD28单抗(批号：12-0280-81，美国eBioscience公司)；考马斯亮兰试剂盒(批号：20120509，南京建成生物工程研究所)。
1.2 仪器
CASTEAX2100型全自动酶联免疫分析仪(美国Beckman公司)；FACSCalibur流式细胞仪(美国Becton Dicknson公司)。
1.3 实验动物
健康雄性Wistar大鼠，4月龄，体重200～245 g，平均(223±12)g，由河南省实验动物中心提供。
1.4 分组及处理
50只大鼠随机均分为空白对照组、模型对照组、维生素E组、巴戟天高剂量组、巴戟天低剂量组，每组各10只，各组大鼠常规分笼饲养。模型对照组及巴戟天高、低剂量组大鼠均每天皮下注射质量分数5%D-半乳糖1 mL/kg；空白对照组大鼠均每天皮下注射质量分数0.85%氯化钠溶液1 mL/kg；维生素E组大鼠每天在给予D-半乳糖的同时，给予维生素E 50 mg/(kg·d)灌胃；巴戟天高、低剂量组大鼠在每天给予D-半乳糖的同时，分别给予巴戟天醇提物2.1、0.7 g/(kg·d)灌胃。所有大鼠均连续给药8周，之后进行免疫功能相关指标的检测。
1.5 大鼠脏器指数的检测
首先对每只大鼠进行称重，并记录，然后常规解剖，无菌条件下取出脾脏、胸腺进行称重，计算脏器指数，公式如下：脾脏指数或胸腺指数=(脾脏重量或胸腺重量/大鼠体重)×100%。
1.6 淋巴细胞转化试验
末次给药后次日，将取出的部分脾脏制成脾细胞悬液，调节细胞浓度至1×107/mL，然后加入96孔培养板，每孔200 μL，再加入20 μg/mL ConA(用于T淋巴细胞转化试验)或LPS(用于B淋巴细胞转化试验)，并设对照孔以及ConA刺激孔或LPS刺激孔。置于37℃、5% CO2培养箱中孵育72 h，并采用MTT法测定570 nm处OD值，根据OD值计算T、B淋巴细胞刺激指数，计算公式如下：刺激指数(SI)=(刺激孔OD值/对照孔OD值)×100%。所有实验重复3次，每次设3个复孔。
1.7 IL-2表达检测
末次给药后次日，将取出的部分脾脏与0.85%氯化钠溶液制成10%脾脏组织匀浆，采用双抗夹心ELISA法定量检测IL-2 ......
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