胃癌患者外周血淋巴细胞免疫功能分析
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[摘要] 目的 分析胃癌患者免疫功能情况，并探讨患者不同临床分期(TNM)与免疫功能之间的关系。 方法 选择2011年1月～2012年1月胃癌患者62例(病例组)和同期健康成年人62例(对照组)，采用流式细胞仪检测外周血淋巴细胞亚群及NK细胞表达水平，并根据国际最新TNM分期标准，比较病例组与对照组、不同临床分期患者免疫功能差异。 结果 病例组CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、CD16+CD56+水平均低于对照组，CD8+水平高于对照组，差异均有高度统计学意义(均P < 0.01)；Ⅲ、Ⅳ期胃癌患者与Ⅰ、Ⅱ期患者比较，CD4+/CD8+、CD16+CD56+表达水平较低，而CD8+水平较高，差异均有高度统计学意义(均P < 0.01)。 结论 胃癌患者免疫功能较正常人低，临床分期越后，免疫功能越低。检测胃癌患者淋巴细胞亚群水平可有效评价患者免疫功能状态，并对判断患者预后情况具有一定的指导意义。
[关键词] 胃癌；免疫功能；流式细胞术
[中图分类号] R735.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2013)02(a)-0030-03
胃癌是我国常见的恶性肿瘤之一，最新资料表明，我国恶性肿瘤发病中，胃癌位于第二位，仅次于肺癌，胃癌死亡率位于恶性肿瘤死亡的第三位[1]。大部分胃癌患者确诊时已处于中晚期，其5年生存率低，为7%～34%，故对胃癌的治疗及预后研究是十分必要的。目前研究均表明，机体免疫功能的变化与肿瘤的发生、发展密切相关[2]。因此，本研究采用病例对照研究，应用流式细胞仪分别测定胃癌患者和健康人群中外周血淋巴细胞亚群及自然杀伤细胞(NK)的表达情况，分析胃癌患者免疫功能变化情况，并探讨不同临床病例分期与患者免疫功能之间的关系，为胃癌的临床治疗及判断预后提供科学依据。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选择2011年1月～2012年1月四川省崇州市人民医院收治的门诊或住院胃癌患者62例为病例组，其中，男34例，女28例，年龄31～76岁，中位年龄56岁，所有患者均经病理确诊。选取同期健康体检者62例为对照组，其中，男30例，女32例，年龄28～72岁，中位年龄54岁。两组性别、年龄等一般情况比较，差异无统计学意义(P > 0.05)，具有可比性。
62例病例组患者中，按病理类型分类：腺癌45例，黏液腺癌6例，低、未分化癌4例，印戒细胞癌7例。根据国际最新TNM分期标准[3]对患者进行分期：Ⅰ期8例，Ⅱ期22例，Ⅲ期25例，Ⅳ期7例。见表1。
1.2 检测方法
病例组(未接受手术及放化疗之前)和对照组均于早晨抽取空腹静脉血2 mL，抗凝处理，立即送检。将样本置于流式试管内，分别加入20 μL荧光素标记的鼠抗人单克隆抗体(CD3、CD4、CD8、CD16+56+)，混匀后室温避光保存30 min，随后加入红细胞裂解液，充分混匀后，经反复离心弃上清液，待红细胞完全溶解后用流式细胞仪检测。仪器及配套试剂均由美国Becton Dickson公司生产。检测前进行仪器校正并做好质控，保证检测的准确性。
1.3 统计学处理
采用统计软件SAS 9.2对实验数据进行分析，计量资料数据以均数±标准差(x±s)表示，两两比较采用t检验。计数资料以率表示，采用χ2检验。以P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 病例组与对照组淋巴细胞亚群表达水平的比较
病例组淋巴细胞亚群表达与对照组比较，病例组CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、CD16+CD56+水平均低于对照组，CD8+水平高于对照组，差异均有高度统计学意义(均P < 0.01)。见表2。
2.2病例组患者不同临床分期淋巴亚群表达水平的比较
由于样本量较少，分别将Ⅰ、Ⅱ期，Ⅲ、Ⅳ期合并为一组。与Ⅰ、Ⅱ期患者比较，Ⅲ、Ⅳ期患者CD4+/CD8+、CD16+CD56+表达水平较低，而CD8+水平有所升高，差异均有高度统计学意义(P < 0.01)；CD3+、CD4+水平亦呈升高趋势，但差异无统计学意义(P > 0.05)。
3 讨论
目前研究已证实，机体免疫功能与肿瘤的发生发展密切相关。免疫功能障碍是肿瘤发生的原因之一，而机体产生肿瘤后，会进一步对机体免疫功能造成影响，而由T淋巴细胞、NK细胞介导的细胞免疫在机体抗肿瘤方面起重要作用。
CD3+T细胞反应机体总的免疫功能情况，为CD4+和CD8+T细胞数之和。根据细胞表面标志，T淋巴细胞主要分为CD4+、CD8+两大类，其中CD4+称为辅助T细胞，CD8+称为细胞毒T细胞。CD4+T细胞抗肿瘤作用表现为：一是对NK细胞、巨噬细胞、细胞毒细胞等抗肿瘤作用有协调作用，二是通过自身分泌白细胞介素、干扰素及肿瘤坏死因子等实现抗肿瘤作用，三是少数CD4+T细胞也具有识别MHCⅡ类抗原从而具有杀死肿瘤细胞的作用。另外，新近研究还表明，CD4+T细胞也可以直接识别肿瘤相关抗原，对不具有MHCⅡ类抗原的肿瘤细胞仍可以产生一定的杀伤作用[4]。CD8+T细胞可特异识别细胞表面MHCⅠ类抗原从而杀死靶细胞，同时其在免疫过程中存在负向作用，表现为抑制免疫应答抗原提呈过程和抑制抗体的产生。而NK细胞抗肿瘤作用与T细胞不同，其对肿瘤细胞的杀伤作用不依赖靶细胞是否表达MHC分子，主要通过以下3种方式实现NK细胞的抗肿瘤作用：释放穿孔素和颗粒酶使肿瘤细胞凋亡、自身表达的死亡受体配体(如Fas、TNF配体等)与肿瘤细胞表面死亡受体相结合从而杀伤靶细胞、通过分泌多种细因子杀伤肿瘤细胞。
机体CD4+、NK细胞表达下降和CD8+表达升高即提示机体免疫功能低下，由于CD4+、CD8+细胞在机体免疫过程中存在相互作用，两者只有处于平衡状态才能使机体免疫功能稳定，因此，学术界均认为CD4+/CD8+比值更能反映机体免疫功能水平。本研究显示，胃癌患者较正常人比较，CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、CD16+CD56+水平均显著较低，CD8+水平显著升高，差异有高度统计学意义(P < 0.01)，与相关文献报道结果一致[5]，说明胃癌患者免疫功能受损。其原因可能是一方面由于随着时间的推移，机体对肿瘤免疫产生耐受，抗肿瘤作用越来越弱；另一方面由于肿瘤分泌的免疫抑制因子(TDSF)抑制了T细胞功能、降低了NK细胞活性，从而导致胃癌患者机体免疫功能下降。而且上述免疫机制与肿瘤的发展密切相关，具体表现为随着癌症患者病情的加重，机体免疫功能受抑制越加明显。本次研究对不同临床分期胃癌患者淋巴细胞表达情况进行比较发现，Ⅲ、Ⅳ期患者CD4+/CD8+、CD16+CD56+水平显著低于Ⅰ、Ⅱ期患者，CD8+水平显著升高，差异均有高度统计学意义(均P < 0.01)，CD3+、CD4+水平也稍高，也证实了上述观点，与王润洁等[6]报道一致。同时有研究还表明，淋巴细胞亚群表达水平的不同对肿瘤患者生存率具有一定影响，患者CD4+/CD8+水平越低 ......
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