2型糖尿病大鼠肝脏损伤与固醇调节元件结合蛋白—1c、c—Jun氨基末端激酶表达的关系(1)
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[摘要] 目的 探讨固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)和c-Jun氨基末端激酶(JNK)在2型糖尿病大鼠肝损伤中的表达和意义。 方法 高脂饲料喂养结合小剂量链脲菌素建立2型糖尿病伴肝损伤大鼠模型组，同时以普食喂养的大鼠作为对照组，检测两组大鼠血糖、血脂水平，同时检测SREBP-1c及JNK的蛋白表达水平，观察大鼠肝损伤与SREBP-1c及JNK蛋白表达水平之间的关系。 结果 模型组血糖及血脂水平明显高于对照组，模型组肝功能生化指标检测显示损伤明显，模型组与对照组差异有统计学意义(P < 0.05)；模型组SREBP-1c蛋白表达阳性着色区域积分吸光度值为(51 767.21±3 246.37)，JNK阳性表达率为90.9%；对照组阳性着色区域积分吸光度值为(35 814.37±2 971.52)，JNK阳性表达率为31.6%，两组差异有统计学意义(P < 0.05)。 结论 模型组大鼠SREBP-1c与JNK蛋白表达水平明显高于对照组，2型糖尿病伴肝损伤大鼠的SREBP-1c和JNK蛋白表达明显增加。
[关键词] 2型糖尿病；固醇调节元件结合蛋白；c-Jun氨基末端激酶；肝损伤
[中图分类号] R587.1 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2013)02(b)-0019-03
糖尿病常分为1型与2型，其中2型糖尿病较易引起各类并发症，如视网膜病变、神经病变、酮症酸中毒及肝损伤等，其中肝损伤较为凶险，且肝损伤与糖尿病互相影响形成恶性循环，糖尿病导致糖、脂代谢紊乱，进而引起糖原和脂质在肝细胞堆积及肝微血管病变，其中以脂肪肝和肝硬化较为常见[1]。本文为了探讨2型糖尿病伴肝损伤的临床诊断指标，将2型糖尿病伴肝损伤大鼠作为研究对象，观察肝损害与SREBP-1c、JNK蛋白表达水平之间的相关性[2-3]。
1 材料与方法
1.1 试验动物
健康清洁级SD大鼠60只，雌雄各半，大鼠血糖平均值为(4.41±0.59)mmol/L，平均(4.6±0.2)周龄，平均体重(86.7±5.2)g；所有大鼠试验前均饲以普通饲料，单笼喂养，自由摄食摄水。将60只SD大鼠随机分为模型组和对照组，模型组40只，对照组20只。
1.2 制备动物模型
参照相关2型糖尿病大鼠造模方法，模型组大鼠给予高脂饮食，对照组给予普通饮食，均饲养4周。模型组大鼠形成肥胖性胰岛素抵抗状态，禁食12 h，用pH= 4的1 mmol/L无菌PBS缓冲液将STZ配制成1%溶液，按30 mg/kg的剂量腹腔注射2次/d，共注射2 d，注射完成后再禁食12 h，两组大鼠继续饲养2周。2型糖尿病大鼠模型是否建立成功，以空腹血糖≥ 9 mmol/L确定，伴肝损伤大鼠模型建立以检测肝功能指标确定。本文造模结束时共得到2型糖尿病大鼠32只，2型糖尿病伴肝损伤大鼠25只。两组大鼠乙醚麻醉后眼静脉丛取血，测定血糖、血胰岛素、血三酰甘油、胆固醇及肝功能指标[4]，处死后取出肝脏置于10%甲醛溶液中固定，制作石蜡切片[5]。
1.3 SREBP-1c与JNK检测
采用免疫组织化学法检测SREBP-1c蛋白表达，以PBS作阴性对照，大鼠肝组织石蜡切片常规脱蜡至水后置于2%过氧化氢甲醇溶液中，37℃孵育20 min，滴加一抗和二抗4℃过夜，室温孵育30 min后显色；检测结果以阳性面积和染色深度计算阳性积分吸光度值。检测JNK蛋白表达采用免疫组化染色方法，对照组和模型组大鼠肝组织进行免疫组化染色[6]，按照试剂盒要求操作，以PBS为阴性对照，根据染色强度和阳性细胞百分比综合评价JNK阳性百分表达率。
1.4 血生化指标检测
两组大鼠均以10%水合氯醛(3 mL/kg)腹腔注射麻醉大鼠，下腔静脉取血5 mL加入肝素抗凝管内，室温下待自然凝固后以1 500 r/min离心15 min后，分离血清后于-30℃低温保存备用。血清葡萄糖水平检测中血清葡萄糖(GLU)检测采用己糖激酶法(HK)，血清胰岛素(INS)检测采用酶联免疫法(EIA)，HK试剂盒与双抗体夹心酶联免疫吸附实验试剂盒均购自上海研谨生物科技有限公司；血脂检测中血三酰甘油(TG)试剂盒、游离脂肪酸(FFAs)试剂盒、低密度脂蛋白胆固醇(LDL)试剂盒、高密度脂蛋白胆固醇(HDL)试剂盒、总胆固醇(TC)试剂盒均购自厦门慧嘉生物科技有限公司，以上血脂水平检测均采用酶比色法测定；肝功能检测中丙氨酸氨基转移酶(ALT)试剂盒、门冬氨酸氨基转移酶(AST)试剂盒、总胆红素(TBiL)试剂盒、白蛋白(Alb)试剂盒、透明质酸酶(HA)试剂盒和层黏蛋白(LN)试剂盒购自湖南永和阳光科技有限责任公司，其中ALT、AST检测采用酶速率法，TBiL、Alb、HA及LN检测采用重氮终点法；以上各项生化指标检测均采用BT-2245全自动生化分析仪进行检测。
1.5 统计学方法
将各检测资料建立数据库 ......
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