大孔树脂纯化五味子总木脂素、总三萜工艺研究(1)
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[摘要] 目的 考察大孔树脂纯化五味子总木脂素总三萜的最佳工艺。 方法 比较了5种不同类型大孔树脂对五味子总木脂素、总三萜、五味子醇甲的吸附解析性能，确定适宜的树脂类型和最佳纯化工艺条件。 结果 AB-8型树脂吸附解析效果最好；最佳工艺条件：上样液浓度1.5 mg/mL，最大上样量7BV，蒸馏水洗脱体积9BV，洗脱溶剂为30%乙醇(9BV)+80%乙醇(10BV)；纯化后终产品中总木脂素、总三萜、五味子醇甲的质量分数分别为39.55%、13.96%、8.95%。 结论 本文所报道的梯度洗脱法可显著提高终产品中总木脂素、总三萜、五味子醇甲的质量分数，验证了其工业生产的可能。
[关键词] 五味子；总木脂素；总三萜；五味子醇甲；大孔吸附树脂
[中图分类号] R284 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2013)02(b)-0106-04
五味子Schisandra chinensis(Turcz.)Baill为著名中药，具有益气生津、敛肺滋肾、止泻、安神等功效，其主要活性成分为总木脂素和总三萜。现代药理学研究表明，五味子总木脂素具有保护心肌、降血压、降血脂等功效[2]，三萜类物质具有抗病毒、抗肿瘤等功效[3-4]。大孔树脂具有交换速度快、解吸条件温和、再生处理方便、使用周期长等诸多优点，对各类中药有效组分以及中药复方有效部位的精制纯化发挥了重要的作用[5-6]。本文旨在应用大孔吸附树脂同时纯化五味子中总木脂素总三萜，以树脂对总木脂素的吸附解析性能为主要考察指标，兼顾总三萜的吸附解析率，筛选适宜的大孔树脂类型，确定最佳的纯化工艺。本文首次采用梯度洗脱法同时纯化五味子总木脂素总三萜，终产品中有效物质含量显著提高，为高纯度五味子总木脂素总三萜的工业生产提供数据支持。
1 仪器与试药
W-2102 PC型紫外可见分光光度计(上海尤尼柯仪器有限公司)；Waters高效液相色谱系统(Waters2489紫外检测器，Waters2707自动进样器，Waters Empower 3工作站)。
五味子药材(产地为吉林省白山市，由中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所赵晓宏副研究员鉴定)；五味子醇甲(中国药品生物制品鉴定所，批号：110857-201010)；齐墩果酸(中国药品生物制品鉴定所，批号：110709-200505)；D-101、D-201、AB-8、ADS-7、S-8型大孔吸附树脂(购自沧州宝恩吸附材料科技有限公司)；甲醇乙醇分析纯(北京化工厂)；甲醇色谱纯(Burdick&Jackson公司)。
2 方法与结果
2.1 含量测定[1]
2.1.1 五味子总木脂素含量测定
精密称取五味子醇甲0.515 mg，置于10 mL容量瓶中，甲醇定容，摇匀即得。精密量取对照品溶液100、150、 200、250、300、350 μL，分别加甲醇定容至10 mL，在250 nm处测定吸光度，以五味子醇甲浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，得线性回归方程为Y=115.14X+0.023 4，r = 0.999 6，五味子醇甲在0.021～0.072 mg有良好的线性关系。
2.1.2 五味子总三萜含量测定
精密称取齐墩果酸4.760 mg，置于25 mL容量瓶中，甲醇定容，摇匀即得。精密量取对照品溶液100、200、 300、400、500、600 μL挥干溶剂，加0.2 mL 5%香草醛冰醋酸溶液，0.8 mL高氯酸，摇匀后60 ℃水浴15 min，冷却至室温，加入5 mL冰醋酸摇匀，于546 nm处测定吸光度，以齐墩果酸质量为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，得线性回归方程为Y=7.972 7X-0.030 5，r = 0.999 2，齐墩果酸在19.040～114.240 μg范围内线性关系良好。
2.1.3 五味子醇甲含量测定
2.1.3.1 色谱条件 色谱柱为Cyncromis C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为甲醇∶水=65∶35，检测波长为250 nm，流速为1 mL/min，柱温为室温。理论板数按五味子醇甲峰计算应不低于2 000。
2.1.3.2 含量测定 精密称取五味子醇甲对照品4.39 mg置于25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，过0.22 μm微孔滤膜，摇匀即得。分别精密吸取对照品溶液4.0、6.0、8.0、10.0、12.0 μL，注入高效液相色谱仪，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，得到线性回归方程Y=5×106X-155 678，r = 0.999 5，五味子醇甲在0.702～2.118 μg线性关系良好。
2.2 五味子上样液的制备
五味子药材粉碎，加入10倍量的95%乙醇，加热回流3次，每次2 h，将醇提液冷却后过滤 ......
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