多重耐药革兰阴性杆菌Ⅰ类整合子结构与功能分析(3)
1.4 扩增产物的结构分析
1.4.1 Ⅰ类整合子保守区的基因序列测定与分析
Ⅰ类整合子保守区PCR扩增后，取产物7 μL，使用Ph 8.0且含有0.50 μg/mL溴化乙锭的2%琼脂糖凝胶对产物进行电泳分析，电压100V，电泳时间30 min，确定Ⅰ类整合子的典型扩增带，电泳后的PCR扩增产物经回收后送往专业测序机构进行纯化与测序。
1.4.2 Ⅰ类整合子可变区的基因测序与分析
Ⅰ类整合子可变区扩增产物经纯化后，取PCR产物8 μL、10×H buffer溶液2 μL、HinfI溶液1 μL(5 μg/μL)置于反应体系中，随后使用可变区基因限制性内切酶HinfⅠ对扩增产物进行酶切分析，于37℃下水浴处理4 h。酶切处理完成后，对其基因片段进行电泳分析，筛选出出现频率最高的片段，并将其送至专业测序公司进行纯化与测序分析。序列测定后，通过登录GeneBank进行基因比对，确定可变区内的基因盒种类。
1.5 整合子定位分析
为明确Ⅰ类整合子的具体位置，对所有Ⅰ类整合子阳性的菌株的整合子基因进行了Sourthen杂交实验。按照Sourthen杂交实验的操作方法和所用试剂盒的操作指南 ......
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1.4.1 Ⅰ类整合子保守区的基因序列测定与分析
Ⅰ类整合子保守区PCR扩增后，取产物7 μL，使用Ph 8.0且含有0.50 μg/mL溴化乙锭的2%琼脂糖凝胶对产物进行电泳分析，电压100V，电泳时间30 min，确定Ⅰ类整合子的典型扩增带，电泳后的PCR扩增产物经回收后送往专业测序机构进行纯化与测序。
1.4.2 Ⅰ类整合子可变区的基因测序与分析
Ⅰ类整合子可变区扩增产物经纯化后，取PCR产物8 μL、10×H buffer溶液2 μL、HinfI溶液1 μL(5 μg/μL)置于反应体系中，随后使用可变区基因限制性内切酶HinfⅠ对扩增产物进行酶切分析，于37℃下水浴处理4 h。酶切处理完成后，对其基因片段进行电泳分析，筛选出出现频率最高的片段，并将其送至专业测序公司进行纯化与测序分析。序列测定后，通过登录GeneBank进行基因比对，确定可变区内的基因盒种类。
1.5 整合子定位分析
为明确Ⅰ类整合子的具体位置，对所有Ⅰ类整合子阳性的菌株的整合子基因进行了Sourthen杂交实验。按照Sourthen杂交实验的操作方法和所用试剂盒的操作指南 ......
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