Toll样受体系统在肾脏衰老中的表达变化(2)

http://www.100md.com 2013年5月15日 邵枫 白雪源 陈香美

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    参见附件。

     1.3 Western blot分析

    用预冷的RIPA裂解液(含50 mmol/L Tris pH 7.5， 150 mmol/L NaCl，1% NP-40，0.1%十二烷基磺酸钠(SDS)，10 mmol/L乙二胺四乙酸(EDTA)，1 mmol/L苯甲基磺酰氟(PMSF)及蛋白酶抑制剂(2 mg/L aprotinin，2 mg/L leupeptin)提取肾组织总蛋白，进行蛋白浓度测定和变性蛋白。取上样量80～100 μg，转膜后用Western blot检测各指标变化。用5%牛血清蛋白(BSA)室温封闭1 h，一抗TLR4、TLR6、TLR8、TLR10和TLR11(1∶200稀释)；TLR9(1∶250稀释)；TLR1、TLR3、TLR5、NF-κB p65和phospho-NF-κB p65(1∶500稀释)；TLR2、TLR7和IK-Bα(1∶1000稀释)，4℃过夜。二抗分别加辣根过氧化物酶标记的抗羊、抗兔或抗鼠IgG(1∶1000稀释)，室温孵育1 h，ECL显影。结果以β-Actin的蛋白表达为内参照，用AlphalmagerTM 2200凝胶图象分析系统，进行半定量分析。

    1.4 RNA提取和逆转录

    1.6 统计学方法

    采用统计软件SPSS 17 ......

    http://www.100md.com/html/paper/1673-0089/2013/14/03-1.htm

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